灰樹花（Grifolafrondosa）一種珍貴的藥服用細(xì)菌，以子囊孢子或菌絲做為服用一部分，具備各種活力作用，如：抗氧化性、降血脂、降低血脂、抗癌、消除重金屬超標(biāo)，而且?guī)в斜容^充足的生物活性化學(xué)物質(zhì)，如，灰樹花含糖量、花青素、谷甾醇類、萜類等活力成份。傳統(tǒng)式灰樹花固體塑造主要是運(yùn)用木渣、麥草及其糧食作物副產(chǎn)物做為生長發(fā)育栽培基質(zhì)，灰樹花采摘后，菌糠則被丟掉，導(dǎo)致較大的自然資源消耗及空氣污染。

開發(fā)設(shè)計(jì)一種新式的灰樹花生長發(fā)育栽培基質(zhì)，并徹底使用其發(fā)醇栽培基質(zhì)具備很高的科研使用價(jià)值。根據(jù)早期的研究將已提升的苦蕎麥、薏米仁等各種各樣栽培基質(zhì)的百分比做為灰樹花發(fā)醇栽培基質(zhì)開展試驗(yàn)?？嗍w麥做為西部地區(qū)一種食藥同源谷類含有黃酮類化合物，其蘆丁成分極高，薏米仁復(fù)含薏米仁酯、薏米仁素和充實(shí)的木薯淀粉化學(xué)物質(zhì)，二者能夠 做為灰樹花發(fā)醇栽培基質(zhì)，為灰樹花的成長給予碳氮源。

天麻（Rhizomagastrodiae）一種名貴中藥，復(fù)含天麻素（p-hydroxymethylphenyl-β-D-glucopyranoside，GA）、對甲基苯甲醇（p-hydroxybenzylalcohol，HA）、對甲基苯甲醛（p-hydroxylbenzaldehyde，HBA）、巴利森苷，具備很高的藥理學(xué)作用。研究組早期實(shí)驗(yàn)證實(shí)了加上一定百分比的天麻提取液參加灰樹花液體深層次發(fā)醇可以明顯地推動灰樹花胞外含糖量的代謝及土壤含水量的提高及其溶解運(yùn)用天麻成份開展生物氧化。將中藥材天麻以不一樣比率的增加量參加灰樹花的固態(tài)發(fā)酵，進(jìn)一步充實(shí)和擴(kuò)展中藥材資源與食用菌菌種共發(fā)醇及其彼此之間互相影響、生物氧化的科研市場前景及其中藥材菌質(zhì)商品的食品藥品使用價(jià)值。

1原材料與方式

1.1原材料與實(shí)驗(yàn)試劑

灰樹花（Grifolafrondosa，菌苗序號：5.404）；天麻，貴州大方；苦蕎麥，貴州威寧；薏米仁，貴州興仁；天麻素標(biāo)準(zhǔn)品、對甲基苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品、對甲基苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)品、巴利森苷標(biāo)準(zhǔn)品、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、異槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品；沒有水硝酸鋁、亞硝酸鈉；其他實(shí)驗(yàn)試劑均為市面上分析純

斜坡培養(yǎng)液為土豆葡萄糖水瓊脂粉（potatodextroseagar，PDA）培養(yǎng)液

1.2儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

BXM-30R型立柱式滅菌鍋；SW-CJ-1D型超凈工作臺；TGL-20M型臺式一體機(jī)快速冷凍離心機(jī)；CTFD-12S型真空泵冷凍式干燥機(jī)；恒溫培養(yǎng)箱；Agilent1100型高效率液相色譜及探測器、Agilent5TC-C18型離子交換柱

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1灰樹花固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)液配置步驟平面圖

1.3.2灰樹花菌苗塑造方式

1.3.2.1斜坡種籽塑造

從母種試管嬰兒中挑菌黃豆粒尺寸真菌塊注射于PDA細(xì)胞培養(yǎng)皿中間，25℃控溫塑造，至真菌爬滿全部斜坡，轉(zhuǎn)置4℃儲存。

1.3.2.2發(fā)醇塑造

培養(yǎng)液成份構(gòu)成：苦蕎粉：4.5g；苦蕎麥皮：1.5g；薏米仁：1.5g；麥麩：0.4g；葡萄糖水：0.1g；

天麻粉：天麻烘干處理，超微粉碎機(jī)粉碎成天麻粉，過60目篩。各自依照培養(yǎng)液質(zhì)量濃度的0、10%、20%、30%、40%、50%添加到發(fā)醇培養(yǎng)液中參加固態(tài)發(fā)酵。

將以上原材料攪拌放水，放置滅菌鍋中殺菌（121℃、30min），培養(yǎng)液減少到室內(nèi)溫度，連接灰樹花菌苗于培養(yǎng)液中，放進(jìn)恒溫恒濕設(shè)備恒溫箱中開展生長發(fā)育發(fā)醇12d（25℃）

1.3.3發(fā)醇栽培基質(zhì)的解決

發(fā)醇栽培基質(zhì)在恒溫恒濕設(shè)備恒溫箱中塑造12d后，將其開展真空泵低溫干燥，干躁過后的發(fā)醇物超微粉并過80目篩，搜集粉末狀，放置-20℃標(biāo)準(zhǔn)下儲存，做為試驗(yàn)原材料。

1.四分析方式

1.4.1黃酮類物質(zhì)成分的測量

精準(zhǔn)稱量0.4g菌粉，添加20mL50%的酒精中，常溫下晃動獲取1h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液。選用NaNO2、Al（NO3）3著色法精確測量，黃酮類物質(zhì)成分以蘆丁劑量表明。

1.4.2天麻素、對甲基苯甲醇、對甲基苯甲醛、巴利森苷成分的測量

1.4.2.1色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

離子交換柱：Agilent5TC-C18型離子交換柱（250mm×4.6mm，5µm）；過柱程序流程：0~35min（0%~30%B），35~40min（30%~100%B），40~45min（100%~3%B）；流動性相：0.1%的硫酸銨水（D）、乙腈（B）；流動速度：1mL/min；檢驗(yàn)光波長：221nm；柱溫：30℃

1.4.2.2試品溶液的配制

精準(zhǔn)稱量0.5g發(fā)醇粉末狀，添加10mL75%酒精，常溫下萃取法12h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液，依照以上高效液相色譜色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）標(biāo)準(zhǔn)開展天麻素、對甲基苯甲醇、對甲基苯甲醛、巴利森苷成分的測量，將各種各樣化學(xué)物質(zhì)的峰總面積帶入標(biāo)曲，獲得各種各樣化學(xué)物質(zhì)的成分。

1.4.3蘆丁、異槲皮苷成分的測量

1.4.3.1色譜儀標(biāo)準(zhǔn)

流動性相：0.02%的硫酸銨水、乙腈；流動速度：1mL/min；檢驗(yàn)光波長：360nm；柱溫：30℃；等度過柱：V（乙腈）∶V（0.02%硫酸銨水）=20∶80

1.4.3.2試品溶液的配制

精準(zhǔn)稱量0.5g發(fā)醇粉末狀，添加10mL工業(yè)甲醇，常溫下萃取法12h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液，依照以上HPLC標(biāo)準(zhǔn)開展蘆丁、異槲皮苷成分的測量，將各種各樣化學(xué)物質(zhì)的峰總面積各自帶入標(biāo)曲，獲得各種各樣化學(xué)物質(zhì)的成分。

1.5數(shù)據(jù)處理方法與剖析

全部的信息應(yīng)用Origin10手機(jī)軟件繪圖，應(yīng)用SPSS19.0手機(jī)軟件開展數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)信息以均值±相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（m±SD）表明（n=3），應(yīng)用單要素方差分析（ANOVA）和匹配t-檢測開展顯著性分析，P<0.05表明數(shù)據(jù)信息具備顯著性差異。

2結(jié)果與剖析

2.1灰樹花固態(tài)發(fā)酵不一樣時(shí)間形狀及表觀構(gòu)造的轉(zhuǎn)變

圖1為灰樹花在未加上天麻培養(yǎng)液上生長發(fā)育轉(zhuǎn)變。在生長發(fā)育7d時(shí)，灰樹花菌絲基本上布滿培養(yǎng)液，且真菌色調(diào)潔白，聯(lián)接高密度，表明灰樹花可以在栽培基質(zhì)上開展常規(guī)的生長發(fā)育，此類培養(yǎng)液未對灰樹花的生長發(fā)育造成抑制效果。

圖2為發(fā)醇組和未發(fā)醇組到不一樣日數(shù)時(shí)菌質(zhì)的表觀形狀圖。由圖2得知，在發(fā)醇組，伴隨著灰樹花發(fā)酵時(shí)間的增加，栽培基質(zhì)構(gòu)造造成很多微小的孔隙度，在發(fā)醇終點(diǎn)站時(shí)，栽培基質(zhì)從外到內(nèi)均發(fā)生了很大的孔隙度，構(gòu)造幾近溶散，對比于發(fā)醇組，未發(fā)醇組栽培基質(zhì)在0~12d的表觀構(gòu)造形狀均未出現(xiàn)突出的轉(zhuǎn)變，構(gòu)造均比較詳細(xì)高密度。

比照二者栽培基質(zhì)的表觀構(gòu)造，表明經(jīng)灰樹花發(fā)醇，對栽培基質(zhì)構(gòu)造發(fā)生了明顯的溶散功效，根據(jù)對栽培基質(zhì)構(gòu)造的毀壞，促使栽培基質(zhì)的營養(yǎng)元素更非常容易進(jìn)行析出，提升了菌絲與栽培基質(zhì)的觸碰總面積，有益于菌絲能夠更好地消化吸收運(yùn)用營養(yǎng)元素給予自己的成長新陳代謝。