薇菜作為食用蔬菜已有悠久的歷史,過去在荒年是救荒草,現(xiàn)已步入高檔餐桌,其經(jīng)濟效益為一般蔬菜的4~5倍。野生薇菜鮮嫩味美,營養(yǎng)豐富,未展開的嫩葉尤為上品。薇菜既可鮮食,又可腌漬、干制,是向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐劑和甜味劑,由于日本的標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)苛,因此檢測出口食品中的食品添加劑含量達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),對于國內(nèi)食品添加劑含量的檢測也是一種保障。
我國標(biāo)準(zhǔn)檢測方法有很多,如滴定法、比色法、薄層色譜法、氣相色譜法等,但都是對樣品分別處理進(jìn)行不同方法的測定,沒有同時檢測的方法?,F(xiàn)在相對先進(jìn)的檢測機構(gòu)都在研究這5種食品添加劑同時檢測的方法,針對于不同的基質(zhì)使用不同方法,目前按照檢測樣品的不同大致可以分為肉食品、飲品、乳制品、含油量高的基質(zhì)和普通基質(zhì)等檢測方法。在我國國標(biāo)中,最早出現(xiàn)對于食品添加劑檢測的是在2003年,那時的檢測針對于單獨的添加劑且方法相對落后。本法采用一種簡單的前處理方法,使用的樣品為水煮薇菜,基質(zhì)簡單易得,用高效液相色譜法對5種添加劑同時進(jìn)樣,一次檢測得到多種結(jié)果,大大節(jié)省了人力、物力和時間,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
一、材料與方法
1、材料與試劑
甲醇(色譜純):FisherScientific公司;乙酸銨(分析純)、稱取1.54g乙酸銨加水溶解并稀釋至1000mL,靜置,過0.45μm孔徑濾膜,鹽酸(分析純):量取100mL鹽酸,與100mL水充分混合,靜置);氨水、乙醚(分析純):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;實驗用水為屈臣氏蒸餾水
2、儀器與設(shè)備
LX—130離心機(控溫)日本TOMY公司;UW402S電子天平,梅特勒一托利多有限公司;UMV一2多管渦旋混合器,北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司;Agilent一1100高效液相色譜儀,安捷倫公司;50mL離心管、10mL移液管、移液槍、一次性吸管、pH試紙、0.5μm水性濾膜等。
3、樣品前處理
大多數(shù)樣品中存在許多大分子物質(zhì),如蛋白質(zhì)、脂肪等,需要使用沉淀劑進(jìn)行凈化處理,如乙酸鋅、亞鐵氰化鉀等,但本樣品不含有上述大分子物質(zhì),故無需進(jìn)行凈化操作。
本法為反提法,即將樣品中的食品添加劑先正提取到乙醚層中,后用水反提取至水層中,定量檢測水層中的食品添加劑。
將水煮薇菜經(jīng)破碎處理后,稱取2.0g樣品于50mL離心管中,加水10mL和0.5mL鹽酸(1+1)進(jìn)行酸化處理。加入乙醚8mL震蕩提取2次(共16mL),合并提取液。將提取液震蕩,離心(4000r/nlin,5min),棄掉下層水層,向提取液中準(zhǔn)確加入10.0mL水,加氨水調(diào)節(jié)pH為7~8,震蕩離心(4000r/min,5min),取下層水層過0.45μm水性濾膜。
4、標(biāo)準(zhǔn)品配制
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純品溶液稀釋,配制成10mg/L濃度的儲備液,將儲備液稀釋成0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10rng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用于測定標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、色譜柱條件
WatersSymmetryShieldC18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱,流動相為0.02mol/L乙酸銨一甲醇(100+5)緩沖溶液,檢測波長為220mm,紫外檢測器,柱溫25℃,流速1mL/min,進(jìn)樣量10μL。
6、精確度測定
為保證試驗精確度,取6份樣品分別編號1,2,3,4,5,6,各稱取2g于50mL離心管中,加入10mL水和0.5mL鹽酸(1+1)進(jìn)行酸化處理。分別加入8mL乙醚提取2次(共16mL),合并提取液經(jīng)震蕩離心(4000r/min)5min,棄去下層水層,準(zhǔn)確加入10.0mL水,用氨水調(diào)節(jié)pH為7~8,震蕩離心(4000r/rnjn,5min),取下層水層過0.45μm水性濾膜。
7、準(zhǔn)確度測定
為保證試驗方法提取到的添加劑含量的有效性,人為地向樣品中添加定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測,通過回收率判斷樣品的檢測結(jié)果是否有效。大量實驗證明,當(dāng)回收率在85%~110%之間時,結(jié)果可靠。向樣品中加入1mg/L的混標(biāo)溶液,與樣品進(jìn)行相同的前處理步驟,經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)儀器檢測。
二、結(jié)果與分析
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
對混標(biāo)稀釋后濃度為0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測定,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別得到回歸方程,見表1。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種添加劑的出峰圖見圖1,按照出峰的時間分別是安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉。
由表1可知,該混標(biāo)溶液出峰時間分散,在檢出限濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
由圖1可知,5種添加劑出峰時間間隔明顯,且峰不存在重合現(xiàn)象,即如果樣品中含有上述5種添加劑,譜圖中會在相應(yīng)位置出峰。
2、樣品測定
對水煮薇菜使用反提法檢測食品添加劑含量,其結(jié)果見表2,譜圖見圖2。
對比圖1和圖2可以看出,圖2中的譜圖沒有在相應(yīng)位置出峰,所以水煮薇菜樣品中不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種食品添加劑。
3、精確度試驗
為保證樣品的精確度,分別對水煮薇菜進(jìn)行6次平行試驗,試驗結(jié)果見表3。
由表3可知,進(jìn)行6次平行試驗均無檢出添加劑,可能的情況是含有添加劑,但含量低于檢出限導(dǎo)致未檢出;另一種情況是均不含添加劑,故無檢出。上述2種情況均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果判定為水煮薇菜不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉5種添加劑。
4、準(zhǔn)確度試驗
為了保證檢測的準(zhǔn)確度,進(jìn)行回收試驗,標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3,結(jié)果見表4。
由圖3和表4可知,人為加入含有混標(biāo)的樣品檢測結(jié)果是含有添加劑的,且同一種方法回收得到的添加劑含量不同。回收率可以證明該方法得到的結(jié)果可信,因為在前處理過程中提取得到的添加劑會有一定程度的損失;當(dāng)回收率低于100%時證明提取不完全或者有損失;當(dāng)回收率高于100%時,說明樣品中同時也含有該添加劑。本法的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上,回收率在89%以上,說明試驗結(jié)果可靠。
5、結(jié)果計算
樣品中山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉、安賽蜜、糖精鈉的含量按照下式計算:
式中:X為樣品中食品添加劑含量,mg/kg;A為進(jìn)樣體積中食品添加劑的含量,mg;V為試樣稀釋體積,mL;m為試樣質(zhì)量,g。
三、討論
試驗表明:對樣品進(jìn)行破碎、浸提后,使用WatersSymmetryShieldC18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱,流動相為0.02mol/L乙酸銨一甲醇(100+5)緩沖溶液,檢測波長為220mm,紫外檢測器,柱溫25℃,流速1mL/min,進(jìn)樣量10μL時,混標(biāo)中安賽蜜、糖精鈉、山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉的出峰時間分別為4.785,6.681,8.117,11.310,12.987min,樣品中未檢出。不同回收率表明在實驗操作過程中,會有不明原因的損失,可能是提取時間不足,可能是提取試劑還有待改善,還有可能是檢測時間不及時,導(dǎo)致部分添加劑降解。在國標(biāo)中以水煮薇菜為例,使用反提法檢測5種食品添加劑,方法簡便,可以節(jié)約大量人力、物力,節(jié)約成本和資源,加快工作效率。
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