現(xiàn)階段,世界各國(guó)的納豆激酶有關(guān)食品類(lèi)品種許多,如納豆激酶復(fù)合型飲品、納豆激酶口服液、納豆激酶低聚肽等。納豆激酶枯草芽孢菌與益生菌粉相近,在生長(zhǎng)發(fā)育繁育全過(guò)程中還可以形成多種多樣新陳代謝物質(zhì):①多種多樣活力抑菌化學(xué)物質(zhì),能夠合理地控制沙門(mén)菌等多種多樣病原菌,可以促消化,提高免疫力;②維他命類(lèi)化合物,如維生素K2能夠與低聚糖耦合,進(jìn)而使人體更合理地運(yùn)用營(yíng)養(yǎng)元素;③)γ-多聚谷氨酸(γ-PGA),在抗菌包裝層面有著較大的使用使用價(jià)值;④低聚果糖,可作為可食用淀粉塑料薄膜的結(jié)構(gòu)性成份;⑤納豆激酶,具備高游離脂肪酸融解活力,可作為心腦血管病疾病的治療藥品。因?yàn)橄鄬?duì)分子質(zhì)量較低且對(duì)pH低的自然環(huán)境可靠性高,因而可用作內(nèi)服。因?yàn)榭梢栽斐蛇@般諸多的活性物質(zhì)和多功能性化學(xué)物質(zhì),因此納豆激酶枯草芽孢菌具備多種多樣運(yùn)用使用價(jià)值,可做為食品防腐劑、微生態(tài)制劑、抑菌劑、免疫增強(qiáng)劑等。
杜蠣的蛋白質(zhì)含量高,維他命、鋅的成分豐富多彩,具備高營(yíng)養(yǎng)成分。但生牡蠣很有可能帶有有危害病菌,比如副血溶弧菌和沙門(mén)菌全是常用的食源性病菌,因而生吃杜蠣有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)。文中以生蠔為原材料,根據(jù)納豆激酶枯草芽孢菌發(fā)醇制取的含有碳水化合物類(lèi)化合物的發(fā)酵物經(jīng)濃縮造成后可用以開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)營(yíng)養(yǎng)成分原漿、油類(lèi),也可用以生物有機(jī)肥、寵物飼料等,可以減少杜蠣以及產(chǎn)品生吃潛在性的安全風(fēng)險(xiǎn),與此同時(shí)提升杜蠣生產(chǎn)加工運(yùn)用概率,提升杜蠣經(jīng)濟(jì)附加值。
一、原材料與方式
1、原材料
杜蠣:市面上;納豆菌酵母粉:上海市賀普實(shí)業(yè)公司有限責(zé)任公司;蛋白胨、牛肉膏、酵母膏,國(guó)藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司。
2、儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備
DH-600AB電加熱恒溫培養(yǎng)箱:北京市zte中興盛業(yè)儀器設(shè)備有限責(zé)任公司;LS-50HD立柱式工作壓力滅菌設(shè)備:江陰市各地醫(yī)療器械有限責(zé)任公司;722紫外線光度計(jì):上海佑科儀表設(shè)備有限責(zé)任公司。
3、方式
(1)納豆激酶枯草芽孢菌的活性及提純
納豆激酶枯草芽孢菌的活性和提純參考宋瑩潔的操作流程。于無(wú)菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)下取0.3g的納豆激酶枯草芽孢菌酵母粉于配有5mLLB液體培養(yǎng)基的試管嬰兒中,37℃塑造24h,隨后用移液器汲取1mL菌懸浮液至LB液體培養(yǎng)基試管嬰兒中接轉(zhuǎn)2代修復(fù)菌苗魅力。于無(wú)菌檢測(cè)情況下將活性后的納豆激酶枯草芽孢菌開(kāi)展提純,37℃塑造24h,隨后在滅菌情況下挑菌形狀優(yōu)良的菌體注射于LB液體培養(yǎng)基試管嬰兒中,在37℃的標(biāo)準(zhǔn)下塑造24h,最終將菌苗接轉(zhuǎn)至LB固態(tài)斜坡培養(yǎng)液中并且于4℃標(biāo)準(zhǔn)下冷凍儲(chǔ)存。
(2)杜蠣發(fā)醇培養(yǎng)液制取
牡蠣肉解除凍結(jié),清理整潔,去除殘?jiān)谄票跈C(jī)中弄成粘稠,散裝至250mL錐形瓶中,固定不動(dòng)料液比1:4(g/mL)、發(fā)醇溫度37℃,調(diào)整pH,葡萄糖水加上量2%,于121℃下高壓滅菌15min,獲得杜蠣發(fā)醇培養(yǎng)液。
(3)單要素實(shí)驗(yàn)提升發(fā)醇加工工藝
本實(shí)驗(yàn)將固定不動(dòng)料液比1:4(g/mL)、發(fā)醇溫度37℃和葡萄糖水加上量2%,提純后冷凍菌苗注射于LB液體培養(yǎng)基中活性,配制至菌懸浮液濃度值為107cfu/mL。各自以發(fā)醇pH、接種量和發(fā)酵時(shí)間為自變量,開(kāi)展單要素實(shí)驗(yàn),每一組實(shí)驗(yàn)采用三個(gè)平行面和一組空白試驗(yàn),在其中發(fā)醇pH為5、6、7、8、9;接種量為2%、4%、6%、8%、10%;發(fā)酵時(shí)間為12h、24h、36h、48h、60h??瞻自囼?yàn)組為發(fā)醇pH7、接種量O%、發(fā)酵時(shí)間12h、24h、36h、48h、60h各一個(gè)。以發(fā)酵物中羥基態(tài)氮成分為測(cè)量指標(biāo)值,科學(xué)研究三個(gè)要素對(duì)杜蠣發(fā)醇實(shí)際效果的危害,對(duì)發(fā)醇加工工藝開(kāi)展基本提升。
(4)正交實(shí)驗(yàn)提升發(fā)醇加工工藝
在實(shí)現(xiàn)單要素實(shí)驗(yàn)和分析數(shù)據(jù)結(jié)果后,挑選合適的發(fā)醇pH標(biāo)準(zhǔn)范疇、接種量和發(fā)酵時(shí)間,及其空白試驗(yàn)組開(kāi)展三要素三水準(zhǔn)L9(34)正交和提升實(shí)驗(yàn)。
(5)蛋白質(zhì)含量的測(cè)量
選用考馬斯亮藍(lán)測(cè)定方法蛋白質(zhì)含量。實(shí)際操作步驟如下所示:
(6)羥基態(tài)氮成分的測(cè)量
參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB18186-2000《釀造醬油》要求選用室內(nèi)甲醛電位差滴定法測(cè)量羥基態(tài)氮成分。實(shí)際操作步驟如下所示:
二、結(jié)果與剖析
1、單要素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如圖所示1所顯示,在發(fā)酵時(shí)間和接種量一定的根基上,當(dāng)杜蠣培養(yǎng)液的pH為5~7時(shí),羥基態(tài)氮的成分呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢(shì),在pH為7時(shí)羥基態(tài)氮的成分超過(guò)了最大值,pH為7~8時(shí)羥基態(tài)氮成分稍有降低,pH為8~9時(shí)降低比較顯著,這有可能是由于納豆激酶枯草芽孢菌生長(zhǎng)發(fā)育的適宜pH為7,并且納豆激酶在pH為7時(shí)納豆激酶蛋白激酶魅力最大。蛋白質(zhì)含量在pH為5~7時(shí)呈下降趨勢(shì),從pH7~9則呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢(shì)。很有可能與納豆激酶枯草芽孢菌產(chǎn)酶魅力降低相關(guān)。