在國家標準GB5009.22—2016方式1:放射性核素稀釋液液相色譜儀-串聯(lián)質(zhì)譜法的根基上開展了方式提升、改善,創(chuàng)建了制酒原材料及純糧酒中黃曲霉B1(AFTB1)的統(tǒng)計分析方法。試品經(jīng)工業(yè)甲醇∶水(7∶3)獲取后,凈化處理封閉液由TritionX-100的PBS改成超純水系統(tǒng),粘度縮小、便于根據(jù)提純小柱。流動性相改成工業(yè)甲醇和0.02%苯甲酸-2mmol/L乙酸銨,提升 了回應(yīng)抗壓強度。梯度方向過柱,經(jīng)高效率液相色譜儀分離出來,在ESI共價鍵方式下掃描儀,開展多反映檢測方式(MRM)檢驗。
結(jié)果顯示,儀器設(shè)備精度優(yōu)良,不一樣濃度值標高效液相對標準誤差(RSD%)均<6%;所制作校準曲線線性相關(guān)優(yōu)良,0.05~10µg/L范疇內(nèi)相關(guān)系數(shù)r值>0.999;方式定量限為0.05µg/kg,方法檢出限<0.01μg/kg,均小于別的檢查方式。原材料與純糧酒的加標回收率都是在90%~105%,徹底符合規(guī)定。此方法檢出限低、精確度高,提升了公司對AFTB1的嚴苛監(jiān)管。
釀造酒原材料具體有高粱米、麥籽、麥子、扁豆等,因制酒原材料使用量很大,釀酒廠一般對原材料大批量選購,開展儲存應(yīng)用,一旦選購原材料存有事故隱患或儲存不合理導致發(fā)霉,將造成一些對身體危害的霉菌毒素類化合物,在其中黃曲霉B1(AFTB1)對身體健康的傷害較大,為強毒副作用、強致癌物質(zhì)化學物質(zhì),已被世衛(wèi)組織癌病組織(IARC)納入一級致癌物。
為了更好地嚴控黃曲霉對身體的損害風險性,進而保證顧客的安全性,英國、日本、澳大利亞等眾多我國已公布了相關(guān)黃曲霉較大限定量的要求,在我國GB2761—2017《食品安全國家標準食品中真菌毒素限量》規(guī)范中也規(guī)定了糧食作物中的真菌毒素B1的較大限定,鳳香型制酒原材料(高粱米、麥籽、麥子、扁豆)中的較大限定各自為10µg/kg、5µg/kg、5µg/kg、5µg/kg。即便如此,但依然存有一定的風險性,因而創(chuàng)建精確、高效率的檢查方式至關(guān)重要。
現(xiàn)階段針對黃曲霉的檢查辦法具體有液相色譜儀-瑩光測定法、酶聯(lián)免疫吸咐篩選法、高光譜檢測法、薄層色譜法、放射性核素稀釋液液質(zhì)聯(lián)用法等。本科學研究創(chuàng)建了制酒原材料及純糧酒中AFTB1的液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS/MS)測定法。該方式試品前解決較簡易、檢驗高效率、精確度高、檢出限更低,進一步達到了顧客對食品衛(wèi)生安全高些的希望和我國對食品安全檢測更嚴的規(guī)定。
1原材料與方式
1.1原材料、實驗試劑與儀器設(shè)備
試品:原材料(高粱米、麥籽、麥子),制成品酒源自于陜西西鳳酒股權(quán)有限責任公司。
實驗試劑:苯甲酸、乙腈、工業(yè)甲醇、乙酸銨(分析純)、超純水系統(tǒng)。
實驗儀器:高效率液相色譜儀串連質(zhì)譜儀器,十分天平秤,氮吹儀,免疫力親和柱。
標準物質(zhì):黃曲霉B1(AFTB1純凈度≥98%),放射性核素內(nèi)標13C17-AFTB1(純凈度≥98%)。
1.2規(guī)范溶液的配制
AFTB1規(guī)范貯備液:稱量AFTB1為1.0mg,用乙腈滴定劑至100mL容量瓶,配置成10µg/mL規(guī)范貯備液。
放射性核素內(nèi)標13C17-AFTB1切削液:精確移取0.5µg/mL的13C17-AFTB10.8mL,用乙腈滴定劑至10mL,配置成40ng/mL的放射性核素內(nèi)標切削液。
AFTB1系列產(chǎn)品規(guī)范切削液:移取AFTB1規(guī)范貯備液1.0mL至100mL容量瓶中,用乙腈滴定劑,配置成100ng/mL的AFTB1正中間規(guī)范液。再各自移取AFTB1正中間規(guī)范液5µL、10µL、50µL、100µL、200µL、500µL、800µL、1000µL至10mL容量瓶中,各自加500µL的40ng/mL放射性核素內(nèi)標切削液,用原始流動性相滴定劑,配置成含量為0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、10.0ng/mL的全系列規(guī)范切削液,過0.22µm濾紙,待上機操作。
1.3儀器設(shè)備主要參數(shù)標準
高效液相標準:離子交換柱:Shin-packXR-ODSIIIC18(2.0mmI.D*150mmL.,3.0μm);進樣量:10µL;流動性相:A:0.02%苯甲酸-2mmol/L乙酸銨,B:工業(yè)甲醇;柱溫:40℃;流動速度:0.3mL/min;停留時間:10ms。過柱方法:梯度方向過柱,見表1。
質(zhì)譜分析標準:掃描儀方法:多級別反映檢測(MRM);離子源:ESI,共價鍵方式;加溫塊溫度:450℃;DL溫度:250℃;做霧化氣流動速度:3.0L/min;干躁氣流動速度:15L/min;離子源插口工作電壓 4.5;停留時間:10ms。
1.4實驗方式
1.4.1試品獲取
制酒原材料:精確稱量制酒原材料5g試品于50mL離心管架中,添加250µL放射性核素內(nèi)標切削液,漩渦震蕩攪拌,添加20mL工業(yè)甲醇-水(70 30),渦流攪拌,靜放30min完用均質(zhì)器勻質(zhì)3min,過玻纖過濾紙。精確移取滲瀝液4mL添加12mL的超純水系統(tǒng),混和勻稱,待凈化處理。
酒樣:稱量2g酒樣,添加100µL放射性核素內(nèi)標切削液,添加4mL水,震蕩攪拌,待凈化處理。
1.4.2凈化處理
原材料:待免疫力親和柱維護流液盡后添加以上水溶液,以1滴/s的水流量根據(jù)免疫力親和柱,流完完用2×10mL超純水系統(tǒng)滲濾免疫力親和柱,當然作用力流盡后擠干小柱,精確添加2×0.5mL工業(yè)甲醇過柱,加上1mL水擠干,搜集于色度試管嬰兒中,過0.22µm有機濾膜,待上機操作。
酒樣:待免疫力親和柱維護流液盡后添加1.4.1中酒樣水溶液,當然作用力下滴,流完后加10mL雙蒸水滲濾柱頭,擠干;加2×0.5mL工業(yè)甲醇過柱,加上1mL水擠干,搜集于色度試管嬰兒中,過0.22µm有機濾膜,待上機操作。