近些年，肉雞養(yǎng)殖中抗菌素的亂用造成 病原菌的抗藥性愈來愈強(qiáng)，飼料殘余導(dǎo)致雞脯肉食品衛(wèi)生安全難題遭受顧客的高度關(guān)注，伴隨著2020年無抗限令的執(zhí)行，在我國肉雞養(yǎng)殖進(jìn)到無抗飼養(yǎng)時(shí)期，替抗商品的分析變成新的網(wǎng)絡(luò)熱點(diǎn)，中草藥材中藥制劑、酶制劑、微生態(tài)制劑、精油等均被覺得是不確定性的替抗商品。中草藥材做為一種翠綠色添加物廣泛運(yùn)用于牧畜養(yǎng)殖行業(yè)，其生物活性化學(xué)物質(zhì)可以增進(jìn)小動(dòng)物身心健康生長發(fā)育，使禽畜人體細(xì)胞外液保持穩(wěn)定情況。并且中草藥材具備副作用小、推動(dòng)生長發(fā)育、推動(dòng)動(dòng)植物基礎(chǔ)代謝、無抗藥性、提升精飼料酬勞、預(yù)防傳染病等優(yōu)勢(shì)，它解決了有機(jī)合成藥品副作用大的缺陷，是新一代安全系數(shù)不錯(cuò)的飼料添加物。

中草藥材運(yùn)用于禽畜已被世界各國專家開展了很多科學(xué)研究，大部分科學(xué)研究結(jié)果顯示，在飼糧中加入不一樣成份的棘籽中草藥材，能夠提升肉食雞的生長發(fā)育特性、免疫功能及其肉質(zhì)量，一樣推動(dòng)育肥豬的體重增加速率并改進(jìn)肉質(zhì)量?？墒侵胁菟幉木邆浯钆洳患嫒?、使用量大、做為食品添加劑應(yīng)用欠缺統(tǒng)一的質(zhì)量檢測(cè)規(guī)范等缺陷，棘籽中草藥材調(diào)整人體免疫功能的作用機(jī)制了解尚不清楚，還需進(jìn)一步科學(xué)研究和討論。本實(shí)驗(yàn)致力于評(píng)定棘籽中草藥材對(duì)肉食雞生長發(fā)育特性、免疫器官生長發(fā)育指數(shù)值及人工免疫有關(guān)遺傳基因mRNA表述的危害，為棘籽中草藥材在禽畜生產(chǎn)制造中的運(yùn)用及其取代抗菌素的必要性給予參照。

1.原材料與方式

1.1實(shí)驗(yàn)原材料

實(shí)驗(yàn)用棘籽中草藥材由蘭州市歐特森生物技術(shù)有限責(zé)任公司給予，主要成分為女貞子、板藍(lán)根沖劑、川芎、黃芩、紫丹參、黃芩。肉食雞為科寶505白羽肉雞，購自陜西省寶雞市大德禽業(yè)有限責(zé)任公司。RNA獲取檢測(cè)試劑盒購自英國紐英倫風(fēng)格生物科技企業(yè)（NEB），SYBRqPCRSuperMIx購自近岸高新科技有限責(zé)任公司，RNA反轉(zhuǎn)錄檢測(cè)試劑盒購自法國羅氏制藥有限責(zé)任公司，別的化學(xué)藥品均購自英國SIGMA生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)選用單要素徹底任意設(shè)計(jì)方案，挑選1日齡身心健康‘白羽肉雞’504只，依照組均值體品質(zhì)相仿標(biāo)準(zhǔn)分成7組，每一組6個(gè)反復(fù)，每一個(gè)反復(fù)12只雞，公和母參半，各自喂養(yǎng)基本飼糧（對(duì)照實(shí)驗(yàn)，A組）、基本飼糧＋抗菌素（0.48G/kg氟苯尼考，1～42d，B組）、基本飼糧＋100mL/kg棘籽藥物制劑提取液（C組，14～42d）、基本飼糧＋100mL/kg棘籽藥物制劑提取液（d組，21～42d）、基本飼糧＋100G/kg棘籽中藥材粉末狀中藥制劑（E組，14～42d）、基本飼糧＋100G/kg棘籽中藥材粉末狀中藥制劑（F組，21～42d）、基本飼糧＋20G/kg棘籽中藥材粉末狀中藥制劑（G組，14～42d）。喂養(yǎng)期是42d，分早期（0～21d）和中后期（22～42d）2期開展。

1.3實(shí)驗(yàn)飼糧

基本飼糧構(gòu)成見表1，營養(yǎng)成分主要參數(shù)參照農(nóng)牧業(yè)國家標(biāo)準(zhǔn)NY/T33-2004配置。秘方測(cè)算時(shí)，原材料中干物質(zhì)、粗蛋白、粗蛋白質(zhì)、有機(jī)化合物、鈣和總磷的成分均選用平均誤差，別的指標(biāo)值參照中國飼料成份及營養(yǎng)成分表（2017年第28版）。實(shí)驗(yàn)給予顆粒料喂養(yǎng)肉食雞。

1.4喂養(yǎng)管理方法

實(shí)驗(yàn)肉食雞喂養(yǎng)管理方法參考《科寶肉雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》。選用3層立體式疊籠喂養(yǎng)，隨意吃料和飲用水，日喂養(yǎng)3次。實(shí)驗(yàn)期限內(nèi)維持雞棚內(nèi)一切正常自然通風(fēng)，按基本免疫力程序流程開展免疫力，每天巡欄觀查雞群精神面貌和吃料狀況，遲早各消毒殺菌1次，維持雞棚內(nèi)外氣體日常保潔。

1.5試品收集

1.5.1血夜試品收集

各自于21、28、35、42d以反復(fù)為企業(yè)，在A組和d組中每籠提取與均值體品質(zhì)貼近的2只雞（公和母各1只）收集翅下靜脈血管全血，混和后-20℃儲(chǔ)存，喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)完成后帶到試驗(yàn)室用以細(xì)胞因子的檢驗(yàn)。

1.5.2免疫器官的收集

42日齡，以反復(fù)為企業(yè)每籠提取與均值體品質(zhì)貼近的2只雞（公和母各1只），稱其活品質(zhì)，宰殺解剖學(xué)后馬上分離出來胰腺、肝臟、法氏囊，用濾膜吸去血漬，去除脂肪細(xì)胞后稱鮮品質(zhì)，并測(cè)算免疫器官指數(shù)值。

1.6.2細(xì)胞因子測(cè)量

以βactIn遺傳基因做為內(nèi)參基因，即時(shí)熒光定量測(cè)量肉食雞血夜中IL-2、IL-6、IL-8、IL-100、TLR-3、TLR-3遺傳基因的mRNA相對(duì)性表述量。

1.6.2.1全血RNA的提煉及CdNA的生成

將帶到試驗(yàn)室的血液解除凍結(jié)后馬上獲取全血RNA并開展反轉(zhuǎn)錄，操作步驟按照QuICkRNATMWHolEBloodCATAloGNos。R1201檢測(cè)試劑盒及反轉(zhuǎn)錄檢測(cè)試劑盒表明開展。

1.6.2.2引物設(shè)計(jì)的生成

依據(jù)GENBANk數(shù)據(jù)庫查詢中IL-2、IL-6、IL-8、IL-100、TLR-3、TLR-4和β-actIn的基因序列，運(yùn)用pRIMER5軟件開發(fā)引物設(shè)計(jì)，詳盡編碼序列信息內(nèi)容見表2，全部引物設(shè)計(jì)編碼序列均由武漢市金開瑞生物技術(shù)有限責(zé)任公司開展生成。