華北地區(qū)車后（Plantago asiatica L.）別名車前草、車輪草，為車案底車后屬多年生長雙子葉木本植物，味甘，寒性，生長發(fā)育適應能力強，產我國多省地。華北地區(qū)車后能夠 食藥同源雙用，其味兒香甜，營養(yǎng)元素豐富多彩，帶有含糖量、人參皂甙、醌類、碳水化合物及微量元素檢測等各種成份，具備增強免疫作用、緩解疲勞、抗氧化性等作用?，F(xiàn)階段進行與華北地區(qū)車后提取液有關的分析較少，本試驗進行華北地區(qū)車后提取液的抗菌活力以及可靠性科學研究，致力于對其進一步的綜合利用擁有充分的實際意義。

現(xiàn)階段，世界各國獲取的加工工藝具體有有機溶劑萃取法、超聲波獲取及其微波加熱獲取等，本試驗對于華北地區(qū)車后具備較高生物活性的特性，采用有機溶劑萃取法加工工藝最高程度上保存華北地區(qū)車后提取液的活力。各自科學研究不一樣類型有機溶劑及濃度值對華北地區(qū)車后提取液取的抗菌活力的危害，并對制取的華北地區(qū)車后提取液開展可靠性剖析，為華北地區(qū)車后提取液的提煉和開發(fā)給予合理的參照根據(jù)，能讓其充分發(fā)揮最高的商品經(jīng)濟使用價值。

一、原材料與方式

1、原材料與實驗試劑

橙黃色鏈球菌、大腸埃希菌、大腸埃希氏菌、沙門菌：我國國家行業(yè)標準化學物質研究所試驗室；酒精、甲苯、乙酸丁酯、醫(yī)用乙醚：洛陽市昊華化學藥品有限責任公司；華北地區(qū)車后：選購于本地中藥批發(fā)市場。

2、儀器設備及機器設備

快速萬能粉碎機：北京市科偉永順儀器設備有限責任公司；溫度控制搖床恒溫箱：蘇州AIBOER高新科技技有限責任公司AG3000；臺式一體機恒溫箱：上海市景邁實驗儀器有限責任公司YT230。

3、實驗方法

（1）華北地區(qū)車后粉劑制得

將華北地區(qū)車后干物質破碎，過20目篩。

（2）獲取方式

①水獲取法

選用煎制方法：稱量10g華北地區(qū)車后粉劑，按料液比1∶10（g/mL）添加純凈水，開水獲取4次，每一次1h，合拼四次萃取液，旋蒸。將滲瀝液旋蒸至10mL，放到-4℃冰柜中儲存預留。

②酒精獲取法

取50g華北地區(qū)車后粉劑放置500mL量杯中，添加400mL酒精，料液之比1∶8（g/mL），應用磁力攪拌器拌和4h，操縱環(huán)境溫度為70℃控溫，旋蒸回收利用滲瀝液。滲瀝液在水浴50℃氣溫下分三次旋蒸至粘稠狀無乙醇味水溶液，合拼三次萃取液得中藥浸膏，旋蒸濃縮至干，放到-4℃冰柜中儲存預留。

③甲苯萃取法法

稱量10g華北地區(qū)車后粉劑，各自用40mL、30mL、30mL甲苯萃取法三次，萃取法時間各自為2h、lh、1h。每一次萃取法后緩解壓力旋蒸，留滲瀝液，沉淀再次萃取法。5mL甲苯清洗沉淀并旋蒸，合拼四次滲瀝液，旋蒸濃縮至干，放到-4℃冰柜中儲存預留。

④醫(yī)用乙醚萃取法法

稱量109華北地區(qū)車后干物質于250mL碘量瓶，添加沒有水醫(yī)用乙醚200mL，常溫下泡浸4h，旋蒸，旋蒸濃縮至干，放到-4℃冰柜中儲存預留。

⑤乙酸丁酯獲取法

選用索氏提取法，應用250mL索氏提取器，按料液比1∶20（g/mL）稱量華北地區(qū)車后粉劑5g，用100mL乙酸丁酯開展索氏提取，在穩(wěn)定溫度70℃下獲取3h，旋蒸，搜集滲瀝液。旋蒸至干，放到-4℃冰柜中儲存預留。

（3）供試菌苗的活性及菌懸浮液的制取

培養(yǎng)液的調配及供試菌的活性參考沈萍等的方式 。將活性的供試菌苗接轉后于37℃塑造24h，待菌體做到多數(shù)成長期后，用無菌檢測鹽水做成菌體濃度值為106～10-7CFU/mL的菌懸浮液，備用。

（4）抗菌活力的測量

選用過濾紙片蔓延法：挑選環(huán)形過濾紙片，160℃干熱滅菌器2h，將用不一樣藥水泡浸過的過濾紙片定距置放在有涂菌液的培養(yǎng)皿上，于37℃塑造24h。用十字交叉法精確測量抑菌圈直徑，紀錄數(shù)據(jù)信息，取均值。

（5）與抗菌素抗菌活力比照無菌檢測情況下，取100此指示菌懸浮液勻稱涂抹于LB塑造板上，35min后將泡浸95％酒精的華北地區(qū)車后提取液的無菌檢測過濾紙片圓片，粘貼到指示菌平板電腦上，與此同時做氯霉素、強力霉素、桿菌肽、青霉素、青霉素鈉等藥敏試驗測紙的對照實驗，每一個解決反復3次，37℃塑造ld，觀查各塑造板指示菌的發(fā)育情況及抑菌圈尺寸，測量各解決抑菌圈直徑，即是相對應試品抑菌圈值。

（6）最少抗菌濃度值（MIC）

將華北地區(qū)車后提取液配置成七個濃度梯度及其一個空白試驗，選用過濾紙圓片蔓延法，各自測量。

對橙黃色鏈球菌、大腸埃希菌、糞鏈球菌和沙門菌的MIC值。

（7）華北地區(qū)車后提取液可靠性試驗

①pH對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害將華北地區(qū)車后提取液萃取液各自調整pH至2、3、4、5、6、7、8、9、10、11，靜放1h后，在325mm光波長下測量其OD值，剖析不一樣pH對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害。

②陽光照射對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害將華北地區(qū)車后提取液萃取液各自放置太陽光陽光照射、房間內及其遮光自然環(huán)境中，每過1h，在325mm光波長下測量其OD值，剖析陽光照射對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害。

③溫度對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害將華北地區(qū)車后提取液萃取液各自在環(huán)境溫度為30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的標準下水浴加熱1 h后制冷至常溫后，在325mm光波長下測量其OD值，剖析溫度對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害。

④氧化物和氧化劑對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害 各自配置含量為0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％的氧化物H202及其濃度值為0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％的氧化劑Na2S03。將華北地區(qū)車后提取液萃取液每一份10mL各自添加不一樣含量的氧化物和氧化劑1mL混勻，另取一份10mL添加1mL純凈水做為試劑空白。然靜放1 h后，在325mm光波長下測量其OD值，氧化物和氧化劑對華北地區(qū)車后提取液可靠性的危害。