包括單寧酸、皂苷和精油在內(nèi)的天然植物化合物被廣泛認(rèn)為是飼料中抗生素的天然替代品。單寧酸是一類(lèi)多酚類(lèi)化合物，廣泛存在于植物體內(nèi)，具有抗菌、抗寄生蟲(chóng)、抗病毒、抗氧化、抗炎，以及免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性。因此，單寧酸是飼料中抗生素天然替代品的主要研究方向。植物單寧酸具有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)親和力，已成功應(yīng)用于反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中，減少瘤胃蛋白質(zhì)的降解，從而提高蛋白質(zhì)的利用率和動(dòng)物的生產(chǎn)效率。在反芻動(dòng)物日糧中加入含單寧酸的飼料還具有三個(gè)重要作用，即控制動(dòng)物胃氣脹、腸道寄生蟲(chóng)和致病菌。單寧酸在傳統(tǒng)上被認(rèn)為是單胃動(dòng)物和家禽的“抗?fàn)I養(yǎng)因子”，但最近的研究表明單寧酸應(yīng)用得當(dāng)，改善了腸道微生物生態(tài)系統(tǒng)，增強(qiáng)了腸道健康，從而提高了生產(chǎn)性能。植物單寧酸作為飼料中抗生素替代品的適用性取決于許多因素，這些因素導(dǎo)致其觀察到的效果的巨大的可變性。

1、引言

在動(dòng)物生產(chǎn)中抗生素促進(jìn)生長(zhǎng)已經(jīng)使用幾十年，并被證明在提高畜禽生產(chǎn)效率方面是有效的。然而，人們普遍認(rèn)為抗生素作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑促進(jìn)了動(dòng)物中耐抗生素微生物的進(jìn)化和/或選擇(Chattopadhyay, 2014)。在過(guò)去的幾十年里，人們做了大量的研究來(lái)尋找天然的抗生素替代品，植物化合物(或植物源化合物)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)有很大的潛力(Yang et al., 2015)。其中植物單寧受到了廣泛的關(guān)注，可能是目前研究最多的化合物，特別是對(duì)反芻動(dòng)物。單寧的生物學(xué)活性和動(dòng)物對(duì)膳食單寧的反應(yīng)已得到廣泛的綜述，主要集中在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)和生產(chǎn)方面(Mueller-Harvey et al., 2006; Waghorn, 2008; Wang and McAllister,2011; Redondo et al., 201)。本文在簡(jiǎn)述植物單寧酸的一些重要化學(xué)特性和生物學(xué)特性的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)介紹了單寧酸在動(dòng)物的抗菌、抗寄生蟲(chóng)和免疫調(diào)節(jié)等方面的應(yīng)用進(jìn)展。

2、單寧酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)

單寧酸是一種天然存在的多相酚類(lèi)化合物，有不同的結(jié)構(gòu)，具有結(jié)合和沉淀蛋白質(zhì)的能力。單寧酸主要分為三大類(lèi):水解單寧酸(HT)，縮合單寧酸(CT)也稱(chēng)為原花青素和褐藻多酚(PT)。前兩組在陸生植物中發(fā)現(xiàn)，而PT只出現(xiàn)在海洋褐藻中(圖1)。可水解的單寧酸由多酚核(通常為D-葡萄糖)組成，多酚核與酚酸(主要為沒(méi)食子酸或六羥基二苯酸)酯化。HT的分子量在500~3000 Da之間(Haslam, 1989)。它們?nèi)菀妆凰?、堿或酯酶水解，因此容易在消化道中降解和吸收，并可能對(duì)食草動(dòng)物造成潛在的毒性作用(Dollahite et al.，1962;Mdeod, 1974)?？s合單寧酸是由黃烷-3-0單位組成的寡聚或聚合類(lèi)黃酮，包括兒茶素、表兒茶素、沒(méi)食子兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素。與HT相比，CT的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，分子量更高1000~20000Da。與HT不同，只有強(qiáng)氧化和酸性水解才能解聚不容易被厭氧酶降解的CT結(jié)構(gòu)(McSweeney et al.， 2001)。PT是間苯三酚(1.3.5-三羥基苯)聚合的產(chǎn)物，在結(jié)構(gòu)上沒(méi)有陸地單寧(HT和CT)復(fù)雜(Ragan and Glombitza, 1986)。PT的分子量為126 – 650 kDa (Targett and Amold, 1998)，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為6類(lèi)(Phlorethols, Isofuhalos, Ehole, Fucole,Fuhalols, Fucophlorethols)。它們主要是通過(guò)丙二酸酯途徑合成的(Herbert, 1989)，雖然有其他合成途徑被提出(Chen et al.， 1997)。

單寧酸在植物界分布廣泛，尤其在營(yíng)養(yǎng)價(jià)值重要的牧草、灌木、谷類(lèi)和藥材中含量豐富(Salunkheet al.，1982: Wang et al.，1999)。在香蕉、黑莓、蘋(píng)果和葡萄等許多水果中，以及茶中也發(fā)現(xiàn)有單寧酸(Nonaka et al., 1984: Bravo et al., 1992: Mertz et al.,2007;?Mercurio and Smith, 2008;?Kheng, 2010)。在飼料豆類(lèi)，樹(shù)木和灌木中最常見(jiàn)的類(lèi)型是濃縮單寧酸，在熱帶地區(qū)HT通常存在于樹(shù)葉和灌木葉中(Min et al, 2003)。通常情況下，在植物最脆弱的地方單寧酸更豐富，例如，新的葉子和花(Terrill et al., 1992;?VanSoest,1982;?Frutos et al., 2004)。PT集中在植體外皮層的細(xì)胞胞質(zhì)中 (Ragan and Glombitza, 1986;魯?shù)潞涂巳R頓，2004:柴田等，2004)。單寧酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)和濃度在植物種類(lèi)、生長(zhǎng)階段和生長(zhǎng)條件(如溫度、光照強(qiáng)度、養(yǎng)分和暴露于食草環(huán)境)之間有很大的差異?(Frutos et al., 2004: Amslerand Fairhead, 2006;?Berard et al., 2011;?Li et al., 2014;?Huanget al.2017）。

3、單寧酸的生物活性

單寧酸是植物次生代謝物，是植物抵御病原體入侵和昆蟲(chóng)侵襲的化學(xué)防御體系的重要組成部分。單寧酸具有許多生物活性，其中一些對(duì)現(xiàn)代食用動(dòng)物生產(chǎn)最為重要，現(xiàn)綜述如下。

3.1抗菌性能

單寧酸的抗菌活性早已得到公認(rèn)，單寧酸對(duì)細(xì)菌、真菌和酵母的毒性也有綜述(Scalbert. 1991)。到目前為止單寧酸抗菌活性機(jī)制包括抑制胞外微生物酶，剝奪微生物生長(zhǎng)所需的基質(zhì)，通過(guò)氧化磷酸化抑制微生物代謝，剝奪金屬離子或與引起細(xì)胞壁形態(tài)變化和膜透性增加的細(xì)菌形成細(xì)胞膜復(fù)合物(Scalbert, 1991; Liu et al., 2013)。證據(jù)表明微生物細(xì)胞膜是單寧酸抑制作用的主要場(chǎng)所(Mcallister et al., 2005;Liu et al.,2013)，通過(guò)細(xì)胞聚合和細(xì)胞膜的破壞和功能(圖2)。雖然蛋白質(zhì)沉淀是所有單寧酸的普遍特性，但是單寧酸的抗菌活性是微生物種特異性的，與單寧酸的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，單寧酸對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抗菌活性大于對(duì)革蘭氏陰性菌的抗菌活性(Ikigai et al., 1993; Smith andMackie, 2004)，因?yàn)楦锾m氏陰性細(xì)菌的外膜是由脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)組成，脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)由外膜的脂多糖和蛋白質(zhì)組成，內(nèi)層由磷脂組成。然而，從幾種植物中分離到的單寧酸，尤其是CT單寧酸對(duì)革蘭氏陰性菌具有較強(qiáng)的抗菌活性。值得注意的是，大腸桿菌0157:H7、沙門(mén)氏菌、志賀氏桿菌、葡萄球菌、假單胞菌、幽門(mén)螺桿菌等病原菌均對(duì)單寧酸敏感(Funatogawa et al.，2004: Doss et al.，2009;Banso and Adeyemo, 2010;Liu etal.，2013)。Wang等(2013)比較12種單寧酸，發(fā)現(xiàn)僅從紫色草原三葉草中分離的CT(Dalea purpurea Vent)和褐藻(Ascophylhum nodosum)中分離的PT具有較強(qiáng)的抗大腸桿菌和抗大腸桿菌0157:H7活性。褐藻多酚的抗菌活性也高于CT和HT (Wang et al.，2009)。已有研究表明，單寧酸氧化過(guò)程中羥基的數(shù)量和過(guò)氧化氫的釋放是影響單寧酸抗菌性能的兩個(gè)重要因素(Akagawa et al.，2003: Smith et al.2003:Mueller-Harvey, 2006)。有研究表明，具有三羥基B環(huán)的黃酮醇(沒(méi)食子兒茶素)對(duì)鏈球菌、梭菌、變形桿菌和葡萄球菌的抑制作用大于具有二羥基B環(huán)的兒茶素(Sakanaka等，1985)。同樣，表兒茶素沒(méi)食子酸和表沒(méi)食子兒茶素酸對(duì)肉毒桿菌的毒性也大于它們的非沒(méi)食子對(duì)應(yīng)物表兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素(Okuda et al.，1985)。由于單寧酸的來(lái)源廣泛其抗菌活性具有很大的多樣性，因此篩選和鑒定對(duì)目標(biāo)微生物有效且特異的單寧酸將是一項(xiàng)連續(xù)不斷的研究工作。

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(A)大腸桿菌(25922株)細(xì)胞培養(yǎng)10 h(對(duì)照組)、(B) 200 ug /ml紫色牧場(chǎng)三葉草的濃縮單寧酸

(C)大腸桿菌(3081株)孵化24 h(對(duì)照組)、(D) 50 ug / mL 酚類(lèi)單寧酸

(E)50 ug / mL可水解單寧酸、(F) 50 ug / mL濃縮單寧酸

3.2 抗寄生蟲(chóng)性能

單寧酸的抗寄生蟲(chóng)特性已在體內(nèi)和體外的研究中得到證實(shí)。從豆類(lèi)牧草中提取的濃縮單寧酸，如紅豆素、大三葉草、牛角花和蝶兒草等，以劑量依賴(lài)的方式降低了紅毛圓線蟲(chóng)卵的孵化比例，抑制肺線蟲(chóng)和胃腸道線蟲(chóng)的發(fā)育呈劑量依賴(lài)性的方式(Molan et al ., 2000 a, 2000 b, 2002)。四種熱帶植物單寧酸提取物主要影響捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)和蛇形毛圓線蟲(chóng)其幼蟲(chóng)蛻皮過(guò)程(Alonso-Diaz et al.， 2008a, 2008b)。從白堅(jiān)木 (Athanasiadou et al.，2001)、菊苣(Molan et al.，2003)和綠茶(Molan et al.，2004)中提取的單寧酸對(duì)幼蟲(chóng)的遷移有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴(lài)性。這些結(jié)果表明單寧酸的抗寄生蟲(chóng)作用發(fā)生在寄生蟲(chóng)生命周期的不同階段。在體外研究中觀察到的各種單寧酸的抗寄生蟲(chóng)作用，在許多綿羊和牛的體內(nèi)研究中得到證實(shí)(Paolini et al., 2003; Heckendorn etal., 2007; Chaweewan et al.,2015; Desrues et al., 2016)。

植物單寧酸的驅(qū)蟲(chóng)機(jī)制已經(jīng)被提出，“直接”作用寄生蟲(chóng)細(xì)胞，通過(guò)1)減少感染性的第三階段幼蟲(chóng)在宿主體內(nèi)，從而減少宿主入侵,2)減少線蟲(chóng)成蟲(chóng)蟲(chóng)卵排泄,3)降低第三階段幼蟲(chóng)發(fā)育(Athanasiadou et al., 2001,2005;Brunet et al., 2008; Hoste et al., 2012)和通過(guò)“間接”作用提高宿主對(duì)線蟲(chóng)的抵抗力(Coop and Kyriazakis, 2001; Min etal., 2003; Tzamaloukas et al., 2006; Pathak et al., 2016)。然而，與它們的抗菌活性相似，單寧酸的驅(qū)蟲(chóng)效果也因單寧酸的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)、寄生蟲(chóng)種類(lèi)或生長(zhǎng)階段和/或宿主種類(lèi)的不同而異(Hoste et al.， 2006,2012)。

3.3 抗氧化性能

天然酚類(lèi)化合物長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是有效的抗氧化劑(Rice-Evans et al.， 1995, 1996)，單寧酸的抗氧化性能在食品工業(yè)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，可預(yù)防心血管疾病、癌癥或骨質(zhì)疏松癥等氧化應(yīng)激相關(guān)疾病(Hollman and Katan, 1999; Scalbert etal., 2005)。結(jié)果表明，相對(duì)分子質(zhì)量較高的CT和HT具有較強(qiáng)的抗氧化活性(Hagerman et al.1998)。羥基的數(shù)量和單寧酸的聚合程度被認(rèn)為與清除自由基的能力有關(guān)(Ariga and Hamano,1990)，單寧酸中羥基最多最容易被氧化(Hodnick et al.,1988)，因此單寧酸具有最大的抗氧化活性。Ricci等(2016)證明，單寧酸作為天然抗氧化劑的有效性是由于其還原和氧化還原活性的復(fù)雜組合，這也有助于其清除自由基。

單寧酸作為潛在的生物抗氧化劑已在許多體外研究中得到證實(shí)(Ho et al., 1999; Lin et al., 2001Beninger and Hosfield, 2003: Barreira et al., 2008)。單寧酸在不同動(dòng)物組織中的體內(nèi)抗氧化活性也得到了證實(shí)。添加含有CT的飼料可以提高牛羊的血清抗氧化活性，從而改善牛羊的抗氧化狀態(tài) (Dutta et al., 2012: Dey and De,2014; Huang et al.. 2015: Peng et al.. 2016)。在羊的日糧中添加白堅(jiān)木單寧酸改善了肌肉 (Luciano et al., 2011)，肝臟和血漿 (López-Andrés et al., 2013)的抗氧化狀態(tài)，并通過(guò)在冷藏過(guò)程中延遲肌紅蛋白氧化來(lái)增強(qiáng)肉色的穩(wěn)定性(Luciano et al., 2009)。由于HT在吸收前在胃腸道中被降解，而CT不能在消化道中被降解和吸收，因此很難解釋單寧酸作為完整的實(shí)體如何在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮抗氧化活性。Lopez-Andres et al.(2013)發(fā)現(xiàn)白堅(jiān)木單寧酸并未在胃腸道中降解或吸收，但是在綿羊肝臟和血漿的抗氧化能力增加，這說(shuō)明CT可能間接影響動(dòng)物組織的抗氧化狀態(tài)。單寧酸蛋白絡(luò)合已經(jīng)表明單寧酸的抗氧化活性降低但沒(méi)有消除(Riedl and Hagerman, 2001: Arts etal., 2002)。據(jù)推測(cè)，膳食單寧酸可能會(huì)在消化過(guò)程中使其他營(yíng)養(yǎng)性抗氧化劑得以保留，也可能在消化過(guò)程中保護(hù)消化道中的蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂質(zhì)免受的氧化損傷(Marshall and, Roberts, 1990)。然而，單寧酸在動(dòng)物組織中的抗氧化機(jī)制尚不清楚。這一領(lǐng)域還需要進(jìn)一步的研究，因?yàn)樘岣呖寡趸芰Ρ徽J(rèn)為是飼喂單寧酸對(duì)動(dòng)物健康和性能的最大收益之一。

3.4 抗炎性能

單寧酸具有不同的抗炎活性 (Mota et al., 1985; Terra et al.,2007; Sugiura et al., 2013; Park et al.,2014)，與抗氧化活性呈正相關(guān) (Gon?alves et al., 2005; Souza etal., 2007; Park et al., 2014)。體外研究表明，葡萄籽中的單寧酸通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)可以降低低級(jí)別炎癥性疾病，如肥胖 (Terra et al., 2007; Chacon et al.,2009)。從黑樹(shù)莓籽中提取的CT具有抑制脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮(NO)(一種誘導(dǎo)炎癥的促炎介質(zhì))的能力，顯示了其抗炎活性(Park et al.,2014)。寬苞水柏枝單寧酸水解物對(duì)巴豆油致小鼠耳部水腫及膠原誘導(dǎo)的DBA/1小鼠關(guān)節(jié)炎均有明顯的抗炎作用(Liu et al., 2015a,b)。作者推測(cè)抗炎作用機(jī)制與清除自由基的能力有關(guān)，而不是HT對(duì)NO和促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的抑制作用。來(lái)源于A. nodosum和Ecklonia cava的褐藻多酚在抑制細(xì)胞因子釋放 (Dutot et al., 2012)、NO和前列腺素– E2產(chǎn)生的能力上也顯示出強(qiáng)大的抗炎作用(Wijesinghe et al., 2013)。需要指出的是，這一領(lǐng)域的研究大多是利用體外模型進(jìn)行的。單寧酸在動(dòng)物體內(nèi)消化后的抗炎作用尚需在體內(nèi)模型中進(jìn)一步評(píng)價(jià)。

3.5 抗病毒性能

單寧酸已被證明對(duì)某些病毒有顯著的活性，例如…人體免疫缺陷病毒(HIV)，牛腺相關(guān)病毒和諾如病毒(Uchiumi et al., 2003: Dil Pasqualeet al. 2012: Zhang et al., 2012)。Yang等(2013)發(fā)現(xiàn)HT (訶子鞣酸)在體外具有相當(dāng)大的抗71型腸道病毒活性，在小鼠模型中通過(guò)抑制病毒復(fù)制有效降低死亡率，緩解臨床癥狀。已經(jīng)證明單寧酸對(duì)HIV-1的抑制作用通過(guò)作用于病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(Tan et al . 1991)，蛋白酶(Xu et al ., 2000)，和整合酶(Au et al ., 2001)抑制HIV-1復(fù)制，或通過(guò)干擾gp41 sex-helix束形成(Liuet al . 2004)抑制HIV-1進(jìn)入靶細(xì)胞。據(jù)報(bào)道，綠茶中的表沒(méi)食子兒茶素具有抑制丙型肝炎病毒(HCV)進(jìn)入的作用(Ciesek et al.，2011; Calland et al., 2012)。Liu等(2015a,b)發(fā)現(xiàn)單寧酸(HT)抑制HCV進(jìn)入和細(xì)胞間傳播，但不干擾細(xì)胞內(nèi)HCV復(fù)制。三種HT (punicalagin punicalin andgeraniin)通過(guò)阻止cccDNA的形成和促進(jìn)cccDNA的衰變，通過(guò)雙重機(jī)制抑制乙肝病毒ccDNA的生成(Liu et al.，2016)。Ueda等(2013)發(fā)現(xiàn)來(lái)源于柿子的單寧酸(Diospyros kaki)能顯著降低12種被測(cè)病毒的病毒感染性，而來(lái)源于綠茶、金合歡、五倍子的單寧酸只對(duì)部分病毒有效，蛋白質(zhì)聚集似乎是柿子單寧酸抗病毒作用的基本機(jī)制。從E cava中分離的褐藻多酚對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶(Ryu et al.,2011)，豬流行性腹瀉病毒(PEDV)和HIV-1 (Karadeniz et al.,2014)具有較強(qiáng)的抗病毒活性，其中豬流行性腹瀉病毒是通過(guò)抑制病毒進(jìn)入和/或病毒復(fù)制(Kwon et al., 2013)。從Eisenia biclis分離的PT對(duì)小鼠諾如病毒(Eom et al.,2015)和人類(lèi)乳頭狀瘤病毒(Kim and Kwak, 2015)也有類(lèi)似的抗病毒活性。

單寧酸

以上信息表明，單寧酸具有不同的抗病毒活性，取決于化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)。雖然單寧酸的抗病毒方式不能完全理解，但是目前獲得的信息表明，抑制病毒吸附細(xì)胞，抑制病毒滲透進(jìn)入細(xì)胞核和抑制病毒反轉(zhuǎn)錄酶可能是一些潛在的機(jī)制(Buzzini et al ., 2008)，單寧酸作為天然抗病毒制劑用于動(dòng)物和家禽行業(yè)需要體內(nèi)的研究進(jìn)一步探索。

4. 單寧酸在反芻動(dòng)物中的應(yīng)用

單寧酸特別是CT廣泛分布于反芻動(dòng)物經(jīng)常食用的具有重要營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的牧草、喬木、灌木和豆科植物中。因此，CT對(duì)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)、健康和生產(chǎn)的影響已被廣泛研究和綜述 (Frutos et al.. 2004:Mueller-Harvey. 2006; Waghorn 2008: Patra and Saxena, 2011; Wang et al., 2015)。濃縮單寧酸對(duì)反芻動(dòng)物具有有益或有害的影響，這取決于反芻動(dòng)物的食用量、種類(lèi)和化學(xué)結(jié)構(gòu)，以及其他飼料的組成，特別是飼料中CP濃度(Mueller-Harvev, 2006)。一般認(rèn)為，在低–中(<50 g/kg DM)濃度的溫和飼料中，在不影響采食量和營(yíng)養(yǎng)消化的情況下，CT有利于反芻動(dòng)物提高蛋白質(zhì)利用率(Barry and Mcnabb, 1999; Waghorn2008)，取決于CT的來(lái)源和用于測(cè)定濃度的分析方法/標(biāo)準(zhǔn)。單寧酸的蛋白質(zhì)沉淀能力，抗微生物、抗寄生蟲(chóng)和抗氧化活性是其在反芻動(dòng)物應(yīng)用最相關(guān)特性。Waghorn(2008)通過(guò)總結(jié)大量研究得出結(jié)論認(rèn)為飼草作為唯一的食物喂養(yǎng)，在L corniculatus中的CT(約30 g CT /公斤DM)對(duì)反芻動(dòng)物生產(chǎn)有益，但是除了減輕寄生蟲(chóng)的影響，在紅豆素、姜黃和豆瓣菜中的CT(濃度通常大于50克/公斤DM)似乎沒(méi)有提高生產(chǎn)力。與溫帶農(nóng)業(yè)相比，嫩草中的CT，典型的溫暖炎熱的氣候，對(duì)反芻動(dòng)物幾乎是有害的，除了減少腸道寄生蟲(chóng)數(shù)量(Waghorn, 2008)。低中濃度的濃縮單寧酸對(duì)反芻動(dòng)物的生產(chǎn)效率是有益的，因?yàn)?/span>CT減少了瘤胃中的蛋白質(zhì)降解，增加了食物到達(dá)小腸吸收的蛋白質(zhì)量(Wang et al. 1994, 1996)。而高濃度時(shí)，由于CT具有收斂性，會(huì)阻礙采食量，通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)的“過(guò)度”保護(hù)，降低蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化，降低瘤胃微生物活性，抑制內(nèi)源性消化酶活性，從而對(duì)動(dòng)物性能產(chǎn)生負(fù)面影響。日糧中CT的濃度根據(jù)來(lái)源不同對(duì)動(dòng)物表現(xiàn)出負(fù)作用(化學(xué)成分及結(jié)構(gòu))。因此，大多數(shù)的研究都集中在篩選和評(píng)價(jià)不同的單寧酸來(lái)源，并確定它們?cè)诜雌c動(dòng)物飼料中的最佳濃度。篩選和識(shí)別潛在的含單寧酸的飼草(e.g.L corniculatus, L. pedunculatus,sainfoin)，可作為動(dòng)物飼料 (Barry and Mcnabb, 1999; Berard etal., 2011 Acharva et al., 2013)，定義不同外源性單寧酸對(duì)集中飼喂的動(dòng)物的性能影響的最佳添加量 (Dschaak et al., 2011;Anantasook etal.. 2015: Rivera-Méndez et al.. 2017)，開(kāi)發(fā)利用熱帶和其他地區(qū)富含單寧酸的樹(shù)葉和灌木，飼料源性的單寧酸是有限的(如堿性處理、單寧酸結(jié)合劑、日糧混合等) (Murdiati et al., 1990; Smith etal., 2005; Wina et al., 2005; Brown and Ng’ambi, 2017)。

單寧酸在反芻動(dòng)物生產(chǎn)中最成功的應(yīng)用可能是減少胃脹氣。胃脹氣是反芻動(dòng)物的一種常見(jiàn)消化障礙。胃脹氣的特征是氣體在瘤胃和網(wǎng)胃內(nèi)積聚，這會(huì)損害消化和呼吸功能 (Wang et al.. 2012)。胃脹氣的原因很多，但植物細(xì)胞進(jìn)入瘤胃后迅速溶解并釋放蛋白質(zhì)，增加瘤胃液粘度是導(dǎo)致胃脹氣的主要因素。單寧酸通過(guò)在咀嚼和反芻過(guò)程中沉淀蛋白質(zhì)而降低蛋白質(zhì)在瘤胃中的溶解度，從而減少脹氣的發(fā)生。因此，含單寧酸的飼料被認(rèn)為是“無(wú)脹氣”的。Li等(1996)估計(jì)只需1.0 mg CT/g DM就可以防止脹氣。在紫花苜蓿中添加紅豆素等含CT的飼料是控制脹氣的有效方法(Fig. 3; Wang et al., 2006; Sottie etal., 2014)。

(引自Wang et al. 2006)

單寧酸在反芻動(dòng)物，特別是放牧反芻動(dòng)物中的另一個(gè)主要應(yīng)用是控制消化道寄生蟲(chóng)。Hoste等(2006)在體內(nèi)研究表明在紅豆仁、蘇拉、胡枝子、牛蒡、菊苣中的單寧酸對(duì)綿羊、山羊和鹿的消化道有顯著的殺蟲(chóng)作用。來(lái)自含羞草(HT)，板栗(HT) 和白堅(jiān)木 (CT) 的外源性單寧酸以及用于控制反芻動(dòng)物腸道中的各種寄生蟲(chóng) (Butter et al., 2001 ;Min and Hart,2003;Min et al.,2005, 2015)。日糧中單寧酸的濃度低于20 g/kg DM不能有效控制反芻動(dòng)物腸道內(nèi)寄生蟲(chóng)。一個(gè)有趣的現(xiàn)象是綿羊可以檢測(cè)到體內(nèi)寄生蟲(chóng)或相關(guān)癥狀，并增加對(duì)富含單寧酸的飼料的偏好(Lisonbee et al.,2009;Juhnke et al.,2012)。

最近，將含單寧酸的飼料添加到日糧中作為減少反芻動(dòng)物消化道食源性致病菌的一種方法，已被研究(表1)。紫色草原三葉草已被證明是一種潛在的可以減輕大腸桿菌0157:H7的飼料，大腸桿菌0157:H7這是一種存在于反芻動(dòng)物消化道的致命的食物致病菌(lin et al.， 2015: Huang et al.,2015)。Huang等人(2015)研究發(fā)現(xiàn)給羔羊喂食含有36 g紫色紫色草原三葉草CT/kg DM其大腸桿菌0157:H7含量顯著低于不喂食CT的羔羊。同樣CT（16-20 g CT/kg DM）也被證明可以減少天然牧場(chǎng)糞便中的大腸桿菌(Jin et al.， 2015)。此外，在飼喂干草飼料的牛日糧中添加濃度為15 g/kg DM的板栗單寧酸可以減少糞便中的大腸桿菌(Min et al.， 2007)。然而來(lái)源于紅豆素和胡枝子的單寧酸在較低濃度(<13.5 g CT/kg DM)時(shí)對(duì)糞便中的大腸桿菌沒(méi)有影響(Lee et al., 2009a,b; Berard et al.,2009)。在日糧添加10~ 20g/kg DM A. nodosum可顯著減少牛糞便中的大腸桿菌0157:H7(表1)。在這些研究中沒(méi)有報(bào)道單寧酸濃度，但 A. nodosum是含有高水平PT的褐藻 (Wang and McAllister, 2011)。

這些研究表明飼喂植物單寧酸是一種切實(shí)可行的方法，可有效減少反芻動(dòng)物消化道中大腸桿菌0157:H7的存在，從而降低動(dòng)物體污染的風(fēng)險(xiǎn)，提高食品安全。

表1 日糧中單寧酸對(duì)反芻動(dòng)物糞便中大腸桿菌和大腸桿菌0157:H7的影響

ECT：萃取濃縮單寧酸

5. 單寧酸在單胃動(dòng)物中的應(yīng)用

與反芻動(dòng)物不同，單寧酸在傳統(tǒng)上被認(rèn)為是單胃動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中的“抗?fàn)I養(yǎng)”因子，對(duì)采食量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和生產(chǎn)性能有負(fù)面影響(Butler, 1992; Redondo et al., 2014)。因此，盡量減少含單寧酸的飼料在豬和家禽飼料中的使用或采取措施降低其膳食濃度，這是飼料工業(yè)的一種常見(jiàn)做法。然而，最近的一些報(bào)道表明一些低濃度的單寧酸改善了單胃動(dòng)物的健康狀況、營(yíng)養(yǎng)和動(dòng)物性能(Schiavone et al., 2008; Zotte andCossu, 2009; Biagia et al., 2010; Brus et al., 2013; Star?evi? et al., 2015)。與反芻動(dòng)物相比，單寧酸促進(jìn)單胃動(dòng)物生長(zhǎng)的作用機(jī)制要少得多。雖然有報(bào)道表明，低濃度的單寧酸增加了單胃動(dòng)物的采食量，從而提高了單胃動(dòng)物的性能，但鑒于單寧酸具有澀味，這似乎不是通過(guò)提高飼料的適口性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。目前的資料表明，單寧酸在單胃動(dòng)物中生長(zhǎng)促進(jìn)作用依賴(lài)于平衡它們的正負(fù)面影響，負(fù)面影響是通過(guò)蛋白質(zhì)和酶消化絡(luò)合對(duì)飼料的適口性的影響，正面影響是它們通過(guò)抗菌，抗氧化和抗炎活動(dòng)促進(jìn)腸道生態(tài)的健康狀況的影響。單寧酸對(duì)動(dòng)物性能的影響最終取決于動(dòng)物的種類(lèi)和它們的生理狀態(tài)、飼料、單寧酸的種類(lèi)以及它們?cè)谌占Z中的濃度。與其他家畜相比，豬似乎對(duì)單寧酸有相對(duì)的抵抗力，它們能夠采食相對(duì)富含單寧酸的飼料而不會(huì)出現(xiàn)任何中毒癥狀(Pinna et al. 2007)。這可能是由于腮腺肥大和唾液中分泌的富含脯氨酸的蛋白質(zhì)結(jié)合和中和單寧酸的毒性作用(Cappai et al.,2010, 2014)。與用于反芻動(dòng)物的單寧酸的巨大來(lái)源相比，用于單胃動(dòng)物的單寧酸的來(lái)源相當(dāng)有限，到目前為止只有很少的單寧酸被研究并作為飼料添加劑(表2)。

表2 單寧酸在單胃動(dòng)物中的應(yīng)用

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表2（續(xù)）

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表2（續(xù)）

5.1 板栗單寧酸

來(lái)源于板栗的可水解單寧酸最近被認(rèn)為是單胃動(dòng)物飼料添加劑。雖然體外研究表明它對(duì)動(dòng)物消化道寄生蟲(chóng)和病原體有很強(qiáng)的抑制作用(Chung et al., 1998; Athanasiadou etal., 2000; Butter et al., 2001)，但體內(nèi)評(píng)估對(duì)動(dòng)物性能的結(jié)果并不一致。在豬日糧中添加0.11%-0.45%板栗HT，發(fā)現(xiàn)HT提高飼料效率傾向于增加空腸中乳酸桿菌數(shù)量和減少盲腸中氨，異丁酸，異戊酸的濃度，但是對(duì)盲腸中細(xì)菌數(shù)量，糞便中沙門(mén)氏菌數(shù)量沒(méi)有影響(Biagia et al.. 2010; Parys et al.,2010)。然而將濃度從0.71%提高到1.5%會(huì)降低飼料效率，但不影響采食量增長(zhǎng)和胴體重量(Bee et al.， 2016)。Stukeli等(2010)報(bào)道，0.15%的板栗HT與0.15%的酸的混合物對(duì)豬的健康狀況或生長(zhǎng)性能沒(méi)有影響，而Brus等(2013)研究發(fā)現(xiàn)0.19%的板栗HT與0.16%的酸混合使腸道中的乳酸菌增加，大腸桿菌數(shù)量減少。

Schiavone等(2008)研究了添加0.15%、0.20%和0.25%的板栗單寧酸產(chǎn)品(77.8% HT)對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響。結(jié)果表明，添加0.20%的板栗單寧酸可提高日采食量和平均日增重。但是當(dāng)添加0.25%時(shí)，由于所有的測(cè)量參數(shù)都是最低的，似乎會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。Jamroz等(2009)研究了日糧中添加0.025%、0.05%和0.1%的甜栗單寧酸對(duì)雞的性能、腸道微生物菌群和腸道組織學(xué)特征的影響。結(jié)果表明，添加單寧酸對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率和胴體質(zhì)量無(wú)影響，但添加0.1%單寧酸，末體重下降，母細(xì)胞增殖速度減慢。添加0.05%~0.1%單寧酸，28日齡雞小腸大腸桿菌和大腸桿菌菌群減少。在另一項(xiàng)研究中，Rezar和Salobir(2014)研究發(fā)現(xiàn)，添加0.07%和0.2%的相同單寧酸產(chǎn)品(0.05%和0.1% HT)對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能或有機(jī)質(zhì)、粗蛋白、粗灰分、鈣磷平衡和利用沒(méi)有影響，但糞便中干物質(zhì)含量增加。在一項(xiàng)有挑戰(zhàn)的研究中，Tosi等(2013)報(bào)道，日糧中添加0.71%和1.5%的板栗HT可降低口服這些球蟲(chóng)的肉雞腸道中的產(chǎn)氣莢膜梭菌(柔嫩艾美耳球蟲(chóng)，錐形艾美耳球蟲(chóng)，巨型艾美耳球蟲(chóng))。

添加0.45%和0.5%板栗HT可增加兔子活體重增加和采食量(Maertens and ?truklec, 2006;Zoccarato et al., 2008)。然而，Liu等(2009)研究發(fā)現(xiàn)添加0.5%和1.0%的板栗HT對(duì)兔子的生長(zhǎng)性能沒(méi)有影響。以上信息表明，根據(jù)不同動(dòng)物和日糧類(lèi)型的不同，在豬和兔子的日糧中添加量低于0.5%板栗HT和在雞的日糧中添加量低于0.2%的板栗HT，對(duì)其生長(zhǎng)性能和腸道健康會(huì)有積極的影響。日糧中添加高劑量的板栗HT（高于上述提及到的高劑量），很可能會(huì)通過(guò)降低營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收導(dǎo)致動(dòng)物生長(zhǎng)性能降低(li et al.. 2004: Ebadi et al., 2005;Mansoori, 2009; Mansoori et al., 2015)。

5.2 葡萄單寧酸

葡萄籽和葡萄果渣提取物(釀酒葡萄)中含有大量的多酚類(lèi)化合物，包括CT (Prieur et al., 1994; Choy et al.,2014)，已被評(píng)估作為天然飼料添加劑用于單胃動(dòng)物生產(chǎn)中。Choy等(2014)研究發(fā)現(xiàn)在豬日糧中添加1%的葡萄籽提取物可增加糞便微生物菌群中毛螺菌、Clostridales、乳酸菌和瘤胃菌的數(shù)量。他們發(fā)現(xiàn)葡萄單寧酸中的低聚物(二聚–五聚物)只有部分被腸道微生物代謝，產(chǎn)生的酚類(lèi)代謝產(chǎn)物更容易被吸收。這些酚類(lèi)化合物可能有助于改變菌群數(shù)量，從而對(duì)結(jié)腸產(chǎn)生有益的作用。Wang等(2008)研究發(fā)現(xiàn)，用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染肉雞，在其日糧中添加5 ~ 80 mg/kg葡萄籽提取物CT顯著減少了糞便中柔嫩艾美耳球蟲(chóng)，改善了抗氧化狀態(tài)，降低死亡率和生長(zhǎng)性能的增加，其最有利的結(jié)果是添加10~20 mg CT/kg干物質(zhì)。Farahat等(2017)研究表明在肉雞日糧中添加0.125%~2%葡萄籽提取物具有顯著的抗氧化和免疫刺激劑作用，添加0.125%~0.25%的劑量最佳。進(jìn)一步增加濃度會(huì)對(duì)禽類(lèi)的生長(zhǎng)性能、蛋白質(zhì)和氨基酸的消化產(chǎn)生負(fù)面影響(Chamorro et al.,2013)。葡萄渣是葡萄加工的副產(chǎn)品，包括果皮、果肉等，含有大量的CT和簡(jiǎn)單酚類(lèi)化合物。幾項(xiàng)評(píng)價(jià)葡萄渣對(duì)豬和家禽性能影響的研究表明，日糧中添加10%富含單寧酸的產(chǎn)品，對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能沒(méi)有影響，但增強(qiáng)了抗氧化狀態(tài)，增加了腸道中有益菌的數(shù)量 (Brenes et al., 2008; Viveros etal., 2011; Chamorro et al., 2015)。Yan和Kim(2011)的研究表明，在豬的日糧中添加0.3%的使用布拉酵母菌發(fā)酵的葡萄渣，可以改善豬的生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率，改變皮下脂肪中的脂肪酸模式以及豬肉的一些特性。葡萄渣還能提高豬肉的抗氧化活性，降低豬對(duì)霉菌毒素在胃腸道的吸收。然而，葡萄渣的這些影響可能并不完全歸因于CT，因?yàn)槠渌宇?lèi)化合物也存在于產(chǎn)品中。

5.3 單寧酸

單寧酸是一種HT，來(lái)自不同的植物，包括塔拉豆莢(Caesalpinia spinosa)，五倍子（Rhus semialat）沒(méi)食子或西西里漆樹(shù)葉 (Rhus coriaria)。Lee等(2010)研究表明，日糧添加0.0125% ~ 0.1%的單寧酸對(duì)豬的生長(zhǎng)性能、血液指標(biāo)和血漿狀態(tài)有負(fù)面影響，糞便大腸菌數(shù)量呈線性下降。然而，同樣的作者研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)添加0.0125%的單寧酸時(shí)，對(duì)豬的生長(zhǎng)性能沒(méi)有影響，但對(duì)血液學(xué)和血漿鐵狀態(tài)有負(fù)面影響。添加0.0125%的單寧酸使總厭氧菌、梭狀芽胞桿菌和大腸桿菌數(shù)量減少，雙歧桿菌和乳酸菌數(shù)量增加(Lee et al.， 2009a,b)。在肉雞日糧中添加0.5%單寧酸，肉雞的生長(zhǎng)性能提高，胸部肌肉和大腿肌肉的脂肪含量增加，但血糖濃度和肝臟中膽固醇的含量降低(Star?evi?et al ., 2015)。也有報(bào)道稱(chēng)，日糧中添加0.75%和1.5%的單寧酸不會(huì)改變盲腸沙門(mén)氏菌呈陽(yáng)性的肉雞，也不會(huì)改變?nèi)怆u盲腸中鼠傷寒沙門(mén)氏菌的數(shù)量(Kubena t al.， 2001)。添加2.5%和3.0%單寧酸會(huì)降低生長(zhǎng)雞的體增重和蛋白質(zhì)效率，并通過(guò)減少法氏囊、胸腺和脾臟的重量損傷免疫功能，減少總免疫球蛋白M (1 g)和免疫球蛋白G的水平，減少總白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，且呈劑量依賴(lài)性(Marzo et al ., 1990)。Ebrahim等(2015)發(fā)現(xiàn)添加1%的單寧酸降低肉雞體增重和采食量，在熱應(yīng)激條件下，通過(guò)減少單不飽和脂肪酸，改善了肉雞胸部肌肉的脂肪酸分布。從以上結(jié)果可以看出，單寧酸在豬和家禽中的應(yīng)用均高于其他來(lái)源的單寧酸，但對(duì)動(dòng)物的性能產(chǎn)生積極影響的報(bào)道較少，雖然在一些研究中報(bào)道了抗氧化能力提高。高劑量的(如21%)似乎會(huì)降低動(dòng)物的生產(chǎn)效率。

5.4 其他來(lái)源的單寧酸

有些研究評(píng)估了其他來(lái)源的單寧酸用于單胃動(dòng)物。Iji等(2004)研究表明在肉雞日糧中添加0.5%、1.5%、2.0%、2.5%含羞草單寧酸提取物(CT)，采食量和體增重降低，但在低于1.5%的水平上可以提高飼料效率。在禽類(lèi)日糧中添加單寧酸降低了回腸對(duì)能量、蛋白質(zhì)和氨基酸的消化能力，但對(duì)胰腺和空腸酶的活性無(wú)明顯影響。Cappai等(2014)研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加橡子HT，0.516單寧酸當(dāng)量/kg日糧，HT對(duì)采食量和胃粘膜無(wú)影響，但提高了日糧的效率。本研究評(píng)估了紅色堅(jiān)木CT對(duì)減少柔嫩艾美耳球蟲(chóng)攻毒肉雞球蟲(chóng)病的影響(Cejas et al.， 2011)。研究表明，添加10%CT提取物可使受試雞體重增加，增加腸絨毛比例，減少卵囊排泄。本研究表明，紅色堅(jiān)木CT可能是一種潛在的預(yù)防抗球蟲(chóng)產(chǎn)品。Zotte和Cossu（2009）研究發(fā)現(xiàn)在為期6周的飼養(yǎng)試驗(yàn)中，1%和3%的紅堅(jiān)木單寧酸顯著改善了兔子的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率。

6 單寧酸作為家畜飼料中抗生素的替代品的挑戰(zhàn)

上述信息清楚地表明，雖然植物單寧酸在體外具有較強(qiáng)的抗菌和抗寄生蟲(chóng)作用，但在體內(nèi)觀察到的效果差異很大。許多因素，包括由于植物來(lái)源、生長(zhǎng)條件、加工方法以及使用方法和飼養(yǎng)條件的不同，使得產(chǎn)品的化學(xué)組成有變化，從而導(dǎo)致這種巨大的多樣性。由于這些問(wèn)題的復(fù)雜性，很難對(duì)這些化合物的有效性和安全性進(jìn)行系統(tǒng)和全面的評(píng)估，這無(wú)疑阻礙了單寧酸和單寧酸產(chǎn)品用于畜牧業(yè)作為一種可行的抗菌促生長(zhǎng)劑的應(yīng)用。因此，控制這種變化是開(kāi)發(fā)單寧酸產(chǎn)品作為天然抗菌飼料添加劑的關(guān)鍵。這可能包括從生產(chǎn)到應(yīng)用的所有程序。

藥用植物和草藥長(zhǎng)期使用而不引起耐藥性的原因之一可能是配方中含有的多種化合物或復(fù)合處方具有協(xié)同作用。在復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的混合物中，單個(gè)化合物之間的這種協(xié)同作用使微生物難以適應(yīng)多種化合物。然而，在長(zhǎng)期使用分離的單一植物性抗菌化合物時(shí)可能不會(huì)出現(xiàn)這種情況，這可能導(dǎo)致某些微生物產(chǎn)生耐藥性。抗瘧化合物青蒿素就是一個(gè)很好的例子，它存在于傳統(tǒng)中藥青蒿(青蒿，菊科)中。青蒿作為一種草藥，在中醫(yī)歷史上一直被用來(lái)有效治療瘧疾(Miller and Su. 2011)。然而經(jīng)過(guò)幾十年的使用，純化的青蒿素對(duì)瘧疾的有效性降低，表明微生物對(duì)這種化合物產(chǎn)生了某種程度的耐藥性。這一趨勢(shì)與細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)展趨勢(shì)相似。這表明，在動(dòng)物飼料中長(zhǎng)期使用純化的植物化合物作為抗微生物生長(zhǎng)促進(jìn)劑有產(chǎn)生耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)。目前用于動(dòng)物工業(yè)的單寧酸主要是不同分子大小的混合物的粗提物或含有一系列次生化合物的整株植物。再加上來(lái)自不同來(lái)源和生長(zhǎng)條件的化合物的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)的變化，將降低微生物對(duì)復(fù)雜單寧酸形成耐藥性的可能性。然而在這方面的研究很少，管理機(jī)構(gòu)、科學(xué)界和生產(chǎn)工業(yè)需要共同努力，防止微生物對(duì)單寧酸和其他對(duì)人類(lèi)健康重要的植物次生化合物形成耐藥性，因?yàn)檫@將對(duì)人類(lèi)產(chǎn)生巨大的影響。

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原文：Potential and challenges of tanninsas an alternative to in-feed antibiotics for farm animal production