植酸是一種主要的甲基對硫磷純天然抗氧劑，普遍出現(xiàn)于谷物和植物的種子中。植酸做為抗氧劑的應(yīng)用性科學(xué)研究報導(dǎo)愈來愈多。Munoz等科學(xué)研究報導(dǎo)純天然的磷化合物植酸，可做為尿石癥的潛在性緩聚劑。Lv等研究發(fā)現(xiàn)植酸在帕金森醫(yī)治中發(fā)揮一定的功效，明顯抑止MPTP誘發(fā)的黑質(zhì)（SN）膽堿能體細胞損害，抑止小膠質(zhì)細胞激話和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。Thompson等科學(xué)研究證明了加上內(nèi)源性植酸對緩解木薯淀粉吸收率和對豆類植物的血糖值反應(yīng)能力有影響?？箟难岫罐⑺狨ナ且环N根據(jù)化學(xué)物質(zhì)生成的被國家行業(yè)標準限制的抗氧劑，已被藥物管理處（FDA）建議做為英國安全性食品類和純天然二級食品類抗氧劑?？箟难岫罐⑺狨ゾ邆淇寡趸曰盍Γ谑称沸袠I(yè)中使用普遍，其呈現(xiàn)出生物活性，可用以治療腫瘤等各種病癥。Fathi等運用表層低溫等離子共震技術(shù)性科學(xué)研究牛血清蛋白與抗壞血酸豆蔻酸酯中間的相互影響，發(fā)覺他們相互之間的融合會危害蛋白質(zhì)的構(gòu)像，進而很有可能影響生物活性分子結(jié)構(gòu)在身體的運送和遍布。Zhou等研究發(fā)現(xiàn)抗壞血酸豆蔻酸酯可用以協(xié)作抗癌醫(yī)治。

糖尿病患者是一種隨著新陳代謝和內(nèi)分泌失調(diào)的重疾。大部分糖尿病人遭受高胰島素血癥和胰島素分泌缺點的2型糖尿?。═2DM）的危害，并發(fā)生多種病發(fā)癥，包含大毛細血管和毛細血管功能問題等。一般醫(yī)治T2DM的對策是飲食搭配操縱，適當健身運動，應(yīng)用降血脂和降血脂劑等。抑止α-葡萄糖苷酶是治療糖尿病的方式之一，合理抑止α-葡萄糖苷酶的活力可緩解飯后血糖水準的提升 。Kunyanga等研究表明植酸成分高的綠色植物可高效遏制食品類試品中α-葡萄糖苷酶的活力，其抑止水平與植酸成分立即有關(guān)，而植酸成分很有可能對飯后血糖水準的潛在性醫(yī)治有協(xié)同效應(yīng)。殊不知，植酸和L抗壞血酸豆蔻酸酯2種抗氧劑對α-葡萄糖苷酶的抑止原理末見報導(dǎo)。本分析根據(jù)酶動力學(xué)模型與分子對接技術(shù)性科學(xué)研究植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶的抑制效果，為這2種抗氧劑多功能性科學(xué)研究給予新理念，與此同時為研發(fā)新式酶抑制劑用以治療糖尿病給予理論基礎(chǔ)。

1 原材料與機器設(shè)備

釀酒酵母的α-葡糖苷酶（EC3.2.1.20），英國Singma-Aidrich企業(yè)；阿卡波糖，上海市麥克萊恩生物化學(xué)高新科技有限責任公司；對磺酰氯基-α-D-吡喃葡萄糖水苷（pNPG）、對磺酰氯（pNP），北京市百靈威高新科技有限責任公司；無水碳酸鈉（Na₂CO₃），國藥控股化學(xué)藥品有限責任公司；植酸、L-抗壞血酸豆蔻酸酯，上季風水田農(nóng)業(yè)廣生物技術(shù)有限責任公司；實驗自來水為超純水系統(tǒng)。
SynergyH1多功能酶標識儀器設(shè)備，英國BioTek儀器設(shè)備有限責任公司；HWS-24電加熱恒溫水浴槽，上海市恒世儀器設(shè)備有限責任公司。

2 實驗方式

2.1 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的控制實際效果

α-葡萄糖苷酶能使pNPG水解轉(zhuǎn)化成pNP，反應(yīng)物在紫外線消化吸收光波長405nm處具備較大消化吸收值。化學(xué)物質(zhì)對α-葡萄糖苷酶的控制實際效果測定法依據(jù)論文參考文獻進一步改動。α-葡萄糖苷酶的測活總管理體系為340μL，最先添加133μL0.1mol/L聚磷酸鹽緩沖溶液（磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉混和配置而成，pH6.8），添加10μL5U/mLα-葡萄糖苷酶封閉液，接著添加7μL不一樣濃度梯度的效用物水溶液，混和勻稱后在37℃下孵育10min。添加20μL5mmol/L底物pNPG水溶液，混和勻稱后在37℃下孵育20min。170μL0.1mol/LNa2CO3停止反映。取200μL溶液于96孔板中，選用SynergyH1多功能酶標識儀器設(shè)備在405nm光波長處測得消化吸收值。

被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，植酸濃度值先后為0.15，0.16，0.17，0.18，0.19，0.20，0.205，0.21，0.215，0.220，0.230mol/L，L-抗壞血酸豆蔻酸酯濃度值先后為0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3，0.35，0.4，0.45，0.5，0.55，0.6mmol/L，每一個梯度方向下平行測定5次，獲得不一樣效用物濃度值下最終反映機制的消化吸收值。以α-葡萄糖苷酶剩下酶活的抑制率減少至50%時效用物的含量為即是ＩC50值。將沒有效用物的反映做為空白試驗組。

2.2 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的抑止原理

的抑止原理被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對α-葡萄糖苷酶抑止原理的探討是根據(jù)抑止作用的測定法。α-葡萄糖苷酶的濃度梯度為5，4，3，2，1U/mL，底物pNPG濃度值為5mmol/L，測量效用物在差異濃度值下反映機制的紫外線消化吸收光波長。以酶的濃度梯度為橫坐標軸，管理體系的反應(yīng)速率為縱軸制作原理圖，根據(jù)圖上曲線圖是不是過起點來判斷效用物對α-葡萄糖苷酶的抑止原理。

2.3 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的抑止種類

被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對α-葡萄糖苷酶抑止種類的探討是根據(jù)抑止作用的測定法。α-葡萄糖苷酶的含量為5U/mL，底物pNPG的濃度梯度為5，3.9，2.8，1.7，1.1mmol/L，測量效用物在差異濃度值下反映機制的紫外線消化吸收光波長。以pNPG濃度梯度的最后為橫坐標軸，管理體系的反應(yīng)速率的最后為縱軸制作Lineweaver-Burk類型圖，圖上曲線圖的相交點部位判斷效用物對α-葡萄糖苷酶的抑止種類。根據(jù)二次作Dixon圖，測算抑止參量。

2.4 分子對接技術(shù)性

分子對接技術(shù)性能夠進一步探尋效用物與α葡萄糖苷酶的融合方式。PubChem中免費下載植酸和L-抗壞血酸棕櫚樹豆蔻酸酯的2D構(gòu)造儲存為SDF文件格式。根據(jù)Chem3DPro手機軟件開展轉(zhuǎn)換為3D構(gòu)造儲存為mol2文件格式。UniProt蛋白資源文本檢索釀酒酵母α-葡糖苷酶的一級編碼序列，瀏覽編碼為P53341。挑選與靶點具備72.4%編碼序列同一性的釀酒酵母異麥牙糖酶（PDB編號3AＪ7，1.38Å屏幕分辨率）的分子結(jié)構(gòu)做為模型模版。應(yīng)用MolecularOperatingEnvironment（MOE）同宗搭建模型工具搭建釀酒酵母α-葡糖苷酶的3D構(gòu)造。將酶蛋白和效用物動能降到最低至0.05RMS梯度方向有利于二者連接。搭建的配位化學(xué)物質(zhì)和酶蛋白導(dǎo)進MOE手機軟件中同一對話框，根據(jù)Simulationdock將酶和配位開展半軟性連接。針對每一個配位，配位分子結(jié)構(gòu)根據(jù)姿態(tài)的扭曲產(chǎn)生多種多樣構(gòu)像，盡量平穩(wěn)的構(gòu)像與酶促反應(yīng)袋子融合。挑選出最好是配位構(gòu)像與酶蛋白活力結(jié)構(gòu)域氨基酸殘基的融合方式和相互影響，并應(yīng)用數(shù)據(jù)分析工具PyMol程序流程表明二者相結(jié)合的三維圖像。

2.5 數(shù)據(jù)處理方法

應(yīng)用SPSSStatistics17.0手機軟件開展數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用OriginPro8.5手機軟件制作圖型與剖析。應(yīng)用Chem3DPro手機軟件轉(zhuǎn)換3D構(gòu)造，應(yīng)用MolecularOperatingEnvironment（MOE）手機軟件開展分子對接，應(yīng)用PyMol手機軟件觀查連接結(jié)果的融合方式。全部數(shù)據(jù)信息值均表明為“均值±標準誤差”。

3 結(jié)果與剖析

3.1 效用物對α-葡萄糖苷酶的抑制效果

植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶均有控制實際效果。效用物對酶的比較剩下酶活的抑制率伴隨著效用物含量的提高而減少，當植酸濃度值做到0.195mol/L時，抑制率減少為71%，當抑制率減少到50%時，植酸的濃度值（ＩC50）為（0.207±3.137）mol/L。L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶抑止酶活做到50%時，濃度值為（0.39±0.00838）mmol/L。就ＩC50來講，L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α葡萄糖苷酶的控制實際效果好于植酸。可能是因為L抗壞血酸豆蔻酸酯頭頂部含有酚羥基的苯基更易于與α-葡萄糖苷酶融合。阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶過半數(shù)抑制率ＩC50為658mmol/L，植酸的控制實際效果沒有阿卡波糖的效果非常的好，殊不知L-抗壞血酸豆蔻酸酯的控制實際效果是阿卡波糖的上萬倍。