現(xiàn)階段，世界各國的納豆激酶有關(guān)食品類品種許多，如納豆激酶復(fù)合型飲品、納豆激酶口服液、納豆激酶低聚肽等。納豆激酶枯草芽孢菌與益生菌粉相近，在生長發(fā)育繁育全過程中還可以形成多種多樣新陳代謝物質(zhì)：①多種多樣活力抑菌化學(xué)物質(zhì)，能夠合理地控制沙門菌等多種多樣病原菌，可以促消化，提高免疫力；②維他命類化合物，如維生素K12能夠與低聚糖耦合，進(jìn)而使人體更合理地運(yùn)用營養(yǎng)元素；③)γ-多聚谷氨酸(γ-PGA)，在抗菌包裝層面有著較大的使用使用價值；④低聚果糖，可作為可食用淀粉塑料薄膜的結(jié)構(gòu)性成份；⑤納豆激酶，具備高游離脂肪酸融解活力，可作為心腦血管病疾病的治療藥品。因?yàn)橄鄬Ψ肿淤|(zhì)量較低且對pH低的自然環(huán)境可靠性高，因而可用作內(nèi)服。因?yàn)榭梢栽斐蛇@般諸多的活性物質(zhì)和多功能性化學(xué)物質(zhì)，因此納豆激酶枯草芽孢菌具備多種多樣運(yùn)用使用價值，可做為食品防腐劑、微生態(tài)制劑、抑菌劑、免疫增強(qiáng)劑等。

杜蠣的蛋白質(zhì)含量高，維他命、鋅的成分豐富多彩，具備高營養(yǎng)成分。但生牡蠣很有可能帶有有危害病菌，比如副血溶弧菌和沙門菌全是常用的食源性病菌，因而生吃杜蠣有一定的安全風(fēng)險。文中以生蠔為原材料，根據(jù)納豆激酶枯草芽孢菌發(fā)醇制取的含有碳水化合物類化合物的發(fā)酵物經(jīng)濃縮造成后可用以開發(fā)設(shè)計營養(yǎng)成分原漿、油類，也可用以生物有機(jī)肥、寵物飼料等，可以減少杜蠣以及產(chǎn)品生吃潛在性的安全風(fēng)險，與此同時提升杜蠣生產(chǎn)加工運(yùn)用概率，提升杜蠣經(jīng)濟(jì)附加值。

一、原材料與方式

1、原材料

杜蠣：市面上；納豆菌酵母粉：上海市賀普實(shí)業(yè)公司有限責(zé)任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏，國藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司。

2、儀器設(shè)備與機(jī)器設(shè)備

DH-600AB電加熱恒溫培養(yǎng)箱：北京市zte中興盛業(yè)儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；LS-50HD立柱式工作壓力滅菌設(shè)備：江陰市各地醫(yī)療器械有限責(zé)任公司；722紫外線光度計：上海佑科儀表設(shè)備有限責(zé)任公司。

3、方式

（1）納豆激酶枯草芽孢菌的活性及提純

納豆激酶枯草芽孢菌的活性和提純參考宋瑩潔的操作流程。于無菌檢測標(biāo)準(zhǔn)下取0.3g的納豆激酶枯草芽孢菌酵母粉于配有5mLLB液體培養(yǎng)基的試管嬰兒中，37℃塑造24h，隨后用移液器汲取1mL菌懸浮液至LB液體培養(yǎng)基試管嬰兒中接轉(zhuǎn)2代修復(fù)菌苗魅力。于無菌檢測情況下將活性后的納豆激酶枯草芽孢菌開展提純，37℃塑造24h，隨后在滅菌情況下挑菌形狀優(yōu)良的菌體注射于LB液體培養(yǎng)基試管嬰兒中，在37℃的標(biāo)準(zhǔn)下塑造24h，最終將菌苗接轉(zhuǎn)至LB固態(tài)斜坡培養(yǎng)液中并且于4℃標(biāo)準(zhǔn)下冷凍儲存。

（2）杜蠣發(fā)醇培養(yǎng)液制取

牡蠣肉解除凍結(jié)，清理整潔，去除殘?jiān)?，在破壁機(jī)中弄成粘稠，散裝至250mL錐形瓶中，固定不動料液比1:4(g／mL)、發(fā)酵溫度37℃，調(diào)整pH，葡萄糖水加上量2％，于121℃下高壓滅菌15min，獲得杜蠣發(fā)醇培養(yǎng)液。

（3）單要素實(shí)驗(yàn)提升發(fā)醇加工工藝

本實(shí)驗(yàn)將固定不動料液比1:4(g／mL)、發(fā)酵溫度37℃和葡萄糖水加上量2％，提純后冷凍菌苗注射于LB液體培養(yǎng)基中活性，配制至菌懸浮液濃度值為10⁷cfu／mL。各自以發(fā)醇pH、接種量和發(fā)酵時間為自變量，開展單要素實(shí)驗(yàn)，每一組實(shí)驗(yàn)采用三個平行面和一組空白試驗(yàn)，在其中發(fā)醇pH為5、6、7、8、9；接種量為2％、4％、6％、8％、10％；發(fā)酵時間為12h、24h、36h、48h、60h?？杖睂φ諏?shí)驗(yàn)為發(fā)醇pH7、接種量O％、發(fā)酵時間12h、24h、36h、48h、60h各一個。以發(fā)酵物中羥基態(tài)氮成分為測量指標(biāo)值，科學(xué)研究三個要素對杜蠣發(fā)醇實(shí)際效果的危害，對發(fā)醇加工工藝開展基本提升。

（4）正交實(shí)驗(yàn)提升發(fā)醇加工工藝

在實(shí)現(xiàn)單要素實(shí)驗(yàn)和分析數(shù)據(jù)結(jié)果后，挑選合適的發(fā)醇pH標(biāo)準(zhǔn)范疇、接種量和發(fā)酵時間，及其空缺對照實(shí)驗(yàn)開展三要素三水準(zhǔn)L₉(3⁴)正交和提升實(shí)驗(yàn)。

（5）蛋白質(zhì)含量的測量

選用考馬斯亮藍(lán)測定方法蛋白質(zhì)含量。實(shí)際操作步驟如下所示：

（6）羥基態(tài)氮成分的測量

參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB18186-2000《釀造醬油》要求選用室內(nèi)甲醛電位差滴定法測量羥基態(tài)氮成分。實(shí)際操作步驟如下所示：

二、結(jié)果與剖析

1、單要素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如圖所示1所顯示，在發(fā)酵時間和接種量一定的根基上，當(dāng)杜蠣培養(yǎng)液的pH為5～7時，羥基態(tài)氮的成分呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢，在pH為7時羥基態(tài)氮的成分超過了最大值，pH為7～8時羥基態(tài)氮成分稍有降低，pH為8～9時降低比較顯著，這有可能是由于納豆激酶枯草芽孢菌生長發(fā)育的適宜pH為7，并且納豆激酶在pH為7時納豆激酶蛋白激酶魅力最大。蛋白質(zhì)含量在pH為5～7時呈下降趨勢，從pH7～9則呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢。很有可能與納豆激酶枯草芽孢菌產(chǎn)酶魅力降低相關(guān)。