2、色譜儀和質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)的提升
（1）流動性相的挑選
正相反色譜儀的流動性相一般由水和有機(jī)溶液（如工業(yè)甲醇、乙腈）等構(gòu)成，因?yàn)橐恍┍粶y物正負(fù)極較強(qiáng)，流動性相的過柱工作能力不適合過強(qiáng)，與此同時待剝離的16種添加物有一些正負(fù)極相仿，保存期相仿，選用乙腈為有機(jī)相時造成好多個成分“共排出”狀況較工業(yè)甲醇比較嚴(yán)重，而工業(yè)甲醇可讓16種添加物的保存期相對性延遲時間，與此同時工業(yè)甲醇能夠提升離子化水平，峰總面積相比乙腈為流動性相時大，故挑選工業(yè)甲醇為研究的有機(jī)相；又因?yàn)榱鲃有韵嘁M(jìn)到質(zhì)譜儀器，加上一定量的緩沖液能夠提升響應(yīng)值，因此 考慮到工業(yè)甲醇-苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-乙酸銨水溶液、工業(yè)甲醇-甲酸溶液3種流動性相管理體系。

以被測物在離子交換柱上的分離度、峰形、敏感度等為調(diào)查指標(biāo)值對3種流動性相管理體系實(shí)現(xiàn)了較為。結(jié)果顯示，管理體系中加入了乙酸銨不但更有益于分離出來化學(xué)物質(zhì)在離子交換柱上的保存，并且可以提升黑色素類化合物的水解化水平，提升數(shù)據(jù)信號回應(yīng)，從各化學(xué)物質(zhì)分離度、峰形、響應(yīng)值及其保存期的可靠性等標(biāo)準(zhǔn)開展整體考量，工業(yè)甲醇-10mmol/L乙酸銨做為流動性相時，好于其他二種流動性相，故試驗(yàn)采用工業(yè)甲醇-10mmol/L乙酸銨為流動性相開展梯度方向過柱。
（2）柱溫的挑選
柱溫可以危害離子交換柱的柱效、可選擇性、敏感度和可靠性，柱溫的更改立即危害分離出來作用及分離出來速度。上升柱溫，離子交換柱內(nèi)離子交換法速度隨著上升，有益于提升柱效、減少剖析時間。本試驗(yàn)調(diào)查了柱溫各自為30℃、35℃、40℃時，16種添加物保存期及響應(yīng)值的區(qū)別，發(fā)覺當(dāng)柱溫為30℃時，16種添加物有13種出峰時間均匯集在3～4min，分離度差；提升柱溫至35℃時，柱效提升，分離度和敏感度均有改進(jìn)，再次提升柱溫，分離出來狀況無顯著轉(zhuǎn)變。充分考慮離子交換柱在相比較低氣溫下使用期限較長，本試驗(yàn)設(shè)置柱溫為35℃。提升情況下16種添加物的MRM質(zhì)譜圖見圖1。

（3）質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)的挑選
為取得最好的精確度和分離出來實(shí)際效果，依據(jù)16種添加物的分子式特點(diǎn)，在正、負(fù)二種水解方式下提升被測物的母正離子和特點(diǎn)子離子及其對應(yīng)的質(zhì)譜分析主要參數(shù)。取濃度值為1mg/L的16種化學(xué)物質(zhì)單標(biāo)液先后選用不接離子交換柱立即氣相方法開展質(zhì)譜分析全掃描儀檢驗(yàn)，獲得總體目標(biāo)剖析物一級質(zhì)譜圖，再用氬氣負(fù)電子該母正離子，獲得其二級質(zhì)譜圖，運(yùn)用設(shè)備的全自動調(diào)優(yōu)作用，各自對Q1、Q3、CE等完成提升，明確16種添加物的母正離子和子離子的最好質(zhì)譜分析標(biāo)準(zhǔn)，以硬度比較大的子離子做為定量分析正離子，抗壓強(qiáng)度稍小的子離子為判定正離子。
3、方法學(xué)點(diǎn)評
（1）方式的線形范疇和方法檢出限
將含16種被測物的混和規(guī)范貯備液加上至稀釋液5倍的空缺紅酒試品中，各自配置系列產(chǎn)品混和規(guī)范切削液。

離子交換柱：AcquityUPLCHSST₃柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國Waters企業(yè)）。流動性相：（A）工業(yè)甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨溶液，流動速度0.35mL/min；梯度方向過柱程序流程為：0min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從10%升到90%，并維持2.5min，5.5～5.51min；工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從90%降到10%；5.51min～6.5min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)維持10%。柱溫為35℃；氣相容積：2μL。

分析儀：LCMS-8050；離子源：電噴霧器離子源（ESI）；掃描儀方法：正空氣負(fù)離子與此同時掃描儀；離子源插口工作電壓：0.5kV；做霧化氣：N23.0L/min；干躁氣：N210L/min；撞擊氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱器溫度：400℃；逐行掃描：多反映檢測(MRM)；停留時間：15ms；時間延遲：3ms；以各成分定量分析離子色譜儀峰范圍對相對的濃度值制作各被測物的規(guī)范工作中曲線圖，結(jié)果顯示，線性相關(guān)優(yōu)良，相關(guān)系數(shù)r（r²）都是在0.995之上。

用紅酒試品低加標(biāo)水準(zhǔn)測算各成分的方法檢出限和定量限，用頻率穩(wěn)定度為3明確方式的方法檢出限（LOD），用頻率穩(wěn)定度為10明確方式的定量限（LOQ），各成分在紅酒試品中的方法檢出限范疇在0.2～2μg/L中間。結(jié)果見表2。

（2）精度和利用率
用少量移液器向空缺紅酒試品中精確添加一定量的16種待測物混和標(biāo)液，配出低、中、高3個濃度值水準(zhǔn)開展利用率試驗(yàn)。各自精確稱量16種添加物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10mL深棕色容量瓶中，自來水或工業(yè)甲醇融解并滴定劑，配置成濃度值為1mg/mL的單標(biāo)貯備液，于-18℃下遮光儲存。用工業(yè)甲醇稀釋液并配置正中間濃度值的規(guī)范切削液，于4℃遮光儲存。

依據(jù)須要用流動性相逐步稀釋液，配置成合理含量的混和規(guī)范切削液，現(xiàn)配現(xiàn)用。取紅酒試品2.0mL于10mL容量瓶中，用超純水系統(tǒng)滴定劑，超聲波攪拌，過0.22μm濾紙，滲瀝液供測量。

離子交換柱：AcquityUPLCHSST3柱（100mm×2.1mm,1.8µm，英國Waters企業(yè)）。

流動性相：（A）工業(yè)甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨溶液，流動速度0.35mL/min；梯度方向過柱程序流程為：0min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從10%升到90%，并維持2.5min，5.5～5.51min；工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)從90%降到10%；5.51min～6.5min，工業(yè)甲醇的摩爾分?jǐn)?shù)維持10%。

柱溫為35℃；氣相容積：2μL。

分析儀：LCMS-8050；離子源：電噴霧器離子源（ESI）；掃描儀方法：正空氣負(fù)離子與此同時掃描儀；離子源插口工作電壓：0.5kV；做霧化氣：N23.0L/min；干躁氣：N210L/min；撞擊氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱器溫度：400℃；逐行掃描：多反映檢測(MRM)；停留時間：15ms；時間延遲：3ms。

開展6次反復(fù)試驗(yàn)，測算其利用率及相對性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果顯示，各總體目標(biāo)物均值利用率在89.1%～106.4%中間，相對性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于9.7%，方式的準(zhǔn)確性和精度均合乎多殘余剖析的規(guī)定。
4、具體試品的測量
按所確立的辦法對購置的10批號紅酒試品做好了16種添加物的篩選，每一個試品反復(fù)測量3次。所檢紅酒試品中有一個驗(yàn)出糖精鈉和甜蜜素，成分各自為26.3μg/L、38.9μg/L，其他試品的檢驗(yàn)結(jié)論均為呈陰性。呈陽性試品的MRM質(zhì)譜圖見圖2。

三、結(jié)果
本科學(xué)研究創(chuàng)建了高效率液相色譜儀-串連質(zhì)譜儀器與此同時測量紅酒中甜味素、添加劑和黑色素成分的方式 ，前解決簡易、剖析速度更快、精確度和敏感度高。具體試品的檢驗(yàn)說明，該辦法可以達(dá)到紅酒甜味素、添加劑和黑色素殘余的剖析規(guī)定，與國家標(biāo)準(zhǔn)方式對比，進(jìn)一步提高了剖析工作效率和減少了剖析成本費(fèi)，可以達(dá)到紅酒中痕量元素剖析規(guī)定，特別適合大批紅酒試品中16種添加物的判定和定性分析。