大黑豆因其種皮呈灰黑色而而出名，營養(yǎng)豐富，具備高蛋白食物、低脂肪的特點，其富含營養(yǎng)元素、維他命和黃豆皂角苷等各種作用因素，除此之外，大黑豆還具備美容護膚、抗癌功效；幾丁聚糖是一種玻璃化溫度在2～20中間的低聚糖，具備相對分子質量低、吸咐效果非常的好，水溶好、易被身體消化吸收、生物活性高，調整腸道微生態(tài)、改進腸胃機構特征和增強免疫作用等特性；蛋白的糖基化裝飾，是以化學鍵聯(lián)接的形式將吸水性的糖原化學物質導進蛋白質分子當中，使其不僅有蛋白的分子結構特點，又有糖原成分的親水性特點；研究表明，蛋白糖基化裝飾后呈現(xiàn)出優(yōu)異的乳狀液工作能力，其溶解度、膠凝性、流變學特點、抗氧化、耐熱性、抑菌性等功能性性能也逐步提高。蛋白糖基化裝飾后抗氧化的分析較少；文中運用糖基化裝飾技術性，以幾丁聚糖和大黑豆蛋白質為研究對象，制取幾丁聚糖糖基化大黑豆蛋白質，討論其耐熱性能的轉變，為擴展糖基化蛋白質改性材料和給予純天然的抗氧劑給予基本上技術性根據(jù)。

一、原材料與方式

1、原材料和實驗試劑

大黑豆，黑龍江省房地產青仁黑豆。DPPH(分析純)，英國Sigam企業(yè)；ABTS(AR級)，英國Sigam企業(yè)；水溶維生素E(Trolox)，英國Sigam企業(yè)；幾丁聚糖，浙江省金殼醫(yī)藥有限責任公司；三氯化鐵(FeCl₃)(分析純)，天津市金匯太亞化學藥品有限責任公司；鐵氰化鉀(K₃Fe(CN)₄)(分析純)，天津市收復生物化工研究所；三氯乙酸(分析純)，天津大茂化學藥品廠，磷酸三鈉(Na₃PO₄)(分析純)，天津長鑫宏翔經貿有限責任公司；鉬酸銨(分析純)，天津科密歐化學藥品有限責任公司；亞硝酸鈉(分析純)，天津鴻鑫化學藥品有限責任公司；對羥基苯磺氟苯(分析純)，天津市收復生物化工研究所；硫酸N-(1-萘基)-乙二胺(分析純)，天津市收復生物化工研究所。

2、實驗儀器

DK-98-ⅡA電加熱恒溫水浴鍋購白天津泰斯特儀器設備有限責任公司；紫外線由此可見光度計購自瓦里安高新科技有限責任公司；XS204電子器件電子分析天平購自上海市精學科學研究有限責任公司；漩渦混合器購自江蘇省同君儀器設備高新科技有限責任公司。

3、方式

（1）水溶液配置

①DPPH切削液配備：精準稱重0.0123gDPPH，酒精充足融解并滴定劑至50mL，做為DPPH切削液(0.39mM)。

②PBS緩沖溶液：稱量8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa₂HP0₄和0.24gKH₂P0₄，溶解800mL純凈水中，用HCl調整溶劑的pH至7.4，最終加蒸溜水滴定劑至lL就可以。髙壓蒸氣殺菌20min，儲存于室內溫度或4℃冰柜中。

③ABTS切削液配備：精準稱量0.192lgABTS標準物質融解于50mL純凈水中，做成7.0mol／L的ABTS溶液。精準稱量0.3312g過硫酸鉀融解于500mL純凈水中，做成2.45mmo/L過硫酸鉀溶液。將50mLABTS溶液與50mL過硫酸鉀溶液混和，在常溫下遮光置放12h～16h，產生ABTS氧自由基貯備液。精確汲取1.0mL添加40～50mL的工業(yè)乙醇，在734nm下OD值為O.700±0.020獲得ABTS切削液。

(2)大黑豆蛋白質的制取

①大黑豆分離蛋白：大黑豆蛋白質分離出來獲取的方式參考本科學研究早期實驗中歷經調優(yōu)的獲取計劃方案：400g大黑豆豆柏粉，放水4L，用0.5mol／LNaoH調pH至8.5，50℃水浴拌和1.5h，8000r/min離心式10min取上清液，用0.5mol／L硫酸調pH至4.5，8000r/min離心式10min取下一層固態(tài)，用pH為4.5的純凈水洗二遍，8000r/min離心式10min，取沉積，用0.5mol／LNaOH調pH至7.0，低溫干燥(干躁標準：干躁架溫度-20℃，真空值0.5mbar)

②酶法糖基化大黑豆蛋白質：酶法糖基化大黑豆蛋白質的方式參考本試驗早期實驗中提升所得的計劃方案：取1.5g大黑豆分離蛋白，加1.5g幾丁聚糖，1.0g轉谷氨酰胺酶和100mL純凈水，37℃水準震蕩反映4h，80℃水浴滅酶5min，制冷至常溫后4℃分析去除未融合的幾丁聚糖，低溫干燥。

③自化學交聯(lián)大黑豆蛋白質：為比照不一樣改性材料方式下大黑豆蛋白質的抗氧化，轉谷氨酰胺酶的添加占比同②，取1.5g大黑豆分離蛋白，加1.0g轉谷氨酰胺酶和100mL純凈水，37℃水準震蕩反映4h，80℃水浴滅酶5min，制冷至常溫后4℃分析去除未融合的幾丁聚糖，低溫干燥。

④寒濕法糖基化大黑豆蛋白質：為比照不一樣改性材料方式下大黑豆蛋白質的抗氧化，幾丁聚糖的添加占比同②，取1.5g大黑豆分離蛋白，加1.5g幾丁聚糖和100mL純凈水，90℃水浴4h，取下在25℃水浴5min，4℃分析去除未融合的幾丁聚糖，低溫干燥。

(3)DPPH氧自由基消除工作能力測量

本實驗中DPPH氧自由基消除工作能力測量在參照Sajga等的辦法基本上，稍加修改。汲取1mL待測液，添加2mLDPPH切削液充足混勻，在常溫下遮光30min，在517m處測量該液OD值(Ai)，以工業(yè)乙醇做為空缺，與此同時測量lmL標準溶液與2mL工業(yè)乙醇的OD值(Aj)及1mL工業(yè)乙醇和2mLDPPH切削液溶液的OD值(Ac)，按住式測算DPPH的清除率(SA)。

（4）ABTS隨意消除工作能力測量

參考唐艷公平的方式稍作修改。汲取1.0mL待測液添加1.0mL的ABTS切削液，攪拌。在常溫下遮光10min，于光波長734nm下測其OD值(Ai)，工業(yè)乙醇做為空缺，與此同時測量30μL標準溶液和1.0mL工業(yè)乙醇溶液OD值(Aj)及30μL工業(yè)乙醇和1.0mL的ABTS切削液溶液OD值(Ac)，按住式測算ABTS氧自由基清除率(SA)。

（5）總復原功能的測量

本實驗中試品總復原功能的檢測在Oyaizu等的辦法基本上稍加調節(jié)。取檢測試樣水溶液0.5mL添加pH為6.6的聚磷酸鹽緩沖液和1％的K₃Fe(CN)₆水溶液各2.5mL并攪拌勻稱，于50℃置放20min，添加2.5mL純凈水和1.0mL0.1％的FeCl₃混和勻稱，靜止不動10min后于700nm下測量OD值(用0.5mL的純凈水更換0.5mL試品水溶液別的標準不會改變做為調零水溶液)。

（6）總抗氧化能力的測量

本實驗中總抗氧化能力的測量參考Benzuie和Strain的方式 ，略做改善。應用磷鉬絡離子法，又被稱為鉬藍法?？偪寡趸芰y量基本原理：鉬酸銨會在鹽酸與硫酸銨的效果下產生氧化反應，物質展現(xiàn)翠綠色，該成分在695nm上有較大消化吸收光波長?？寡鮿豌f會市場競爭產生氧化反應，進而危害翠綠色物質的產生量。能夠根據(jù)光度法根據(jù)測量OD值來檢驗鉬藍的生產量，為此間接性的體現(xiàn)出抗氧劑的工作能力。OD值值越高說明抗氧劑的抗氧化能力越強。在具塞試管嬰兒中先后添加1.0mL(3mol／L)H₂S0₄水溶液，1.0mL(0.14mol／L)Na₃P0₄水溶液和1.0mL(0.2mol／L)鉬酸銨水溶液，再各自添加1.0mol之上試品水溶液，純凈水滴定劑至5.0mL混勻，變道于95℃溶液中加溫90min，取下散熱至室內溫度后在695nm光波長下測量OD值。

（7）消除亞磷酸鹽工作能力的測量

本實驗中亞硝酸鈉消除工作能力的測量依據(jù)李佳穎等的方式 ，稍作改動。精確汲取0.5mL試品水溶液于試管嬰兒中，各自添加5μg，mL亞硝酸鈉水溶液250μL，震蕩勻稱，加pH3.0的檸檬酸鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液2.0mL，攪拌后于37℃水浴30min。添加1mL濃度值為0.4％對羥基苯磺氟苯和1mL濃度值為0.2％硫酸N-(1-萘基)-乙二胺，攪拌并滴定劑至標尺，靜放15min，于545nm光波長測量其OD值Ao。同用工業(yè)乙醇替代試品別的標準不會改變，測得吸光度數(shù)值氏；lmL濃度值為0.2％硫酸N-(1-萘基)-乙二胺替換成1.0mL工業(yè)乙醇測量吸光度數(shù)值A₂。按住式測算清除率(SA)。