卷心菜別名赤洋白菜、紅洋白菜，歸屬于十字花科，蕓薹屬洋白菜種的一個變異。十字花科綠色植物之中帶有比較充足的多酚類物質，卷心菜中的多酚類主要是原花青素，原花青素在綠色植物身體關鍵以糖苷的方式存有，卷心菜中的花色苷類物質關鍵為矢車菊黑色素的糖苷。原花青素有著抗氧化性、防癌和降血脂等人體生理活力，與此同時卷心菜原花青素在酸堿性到中性化范疇內能夠 保持色調由紅到紫的變化，能夠普遍使用于糖塊、飲品等食品生產之中，因而將卷心菜原花青素開發(fā)設計變成食用添加劑具備很高的社會價值和經濟收益。

雙水相提純是一種新式的成分分離出來技術性，與傳統(tǒng)式分離出來方式對比，具備標準柔和、商品活力損害小、分離出來流程少、無有機溶液殘余、實際操作簡便等優(yōu)勢，世界各國廣泛運用于蛋白的提純和抗菌素的獲取，近幾年來慢慢運用于天然色素的分離純化科學研究，中國針對應用雙水相提純提純卷心菜黑色素的分析相比較少，海外有相應的報導，但尚未對其提純標準開展提升。

卷心菜黑色素生產制造時，粗提液中包含大量的的糖原殘渣，巨大地危害了色素沉著的質量和可靠性。傳統(tǒng)式工業(yè)生產針對綠色植物原花青素的獲取關鍵選用酸浸水說法、有機溶劑法，也有超音波法?；ㄉ账芤褐邪罅康牡膯翁恰⒍?、低聚木糖和含糖量等殘渣?，F階段，柱色譜儀、快速倒流色譜儀和孔眼吸附樹脂廣泛運用于原花青素的分離出來、提純，能夠完成黑色素與其說糖原成分的分離出來，但與雙水相提純對比，成本費較高、時間較長、對操控規(guī)定嚴苛。因而應用雙水相提純的辦法完成綠色植物原花青素與其說糖原殘渣的分離出來歸屬于一種新式、迅速、成本低的操控方法。本科學研究試著應用雙水相提純技術性，將卷心菜黑色素與糖原化學物質分離出來，根據可選擇性指數表現此辦法的實效性。

一、原材料和方式

1、實驗室儀器

pH211酸度計；TDL-60B低速檔大空間離心脫水機；HY-6兩層震蕩器；752S紫外線由此可見光度計；AR1530分析天平秤。

2、試驗原材料

卷心菜；PEG6000配置成400g／L；甲酸為優(yōu)級純；別的實驗試劑均為分析純。

3、統(tǒng)計分析方法

（1）卷心菜黑色素歸屬于花色苷類，依照英國化學工程師研究會（AOAC）對原花青素類天然色素中花色苷總產量的辦法完成測量，以矢車菊-3-葡萄糖水苷計。

式中：

OD值A=（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH1.0-（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH4.5

M：矢車菊-3-葡萄糖水苷的摩爾質量，449.2g／mol；

D：試品貯備液的稀釋倍數；

1：激光光路長，cm，檢測中選用1cm激光光路長的比色皿；

ε：26900，矢車菊-3-葡萄糖水苷的克分子消光系數，L·mol^-1·cm^-1；

1000：由g計算成mg的變換指數。

（2）應用甲酸-鹽酸法對左右看中總糖成分開展測量。

（3）可選擇性指數k的測算。

式中：

K_花：原花青素的擴散系數；

K_糖：含糖量的擴散系數；

C_里花：上看中原花青素的濃度值，mg／L；

C_下花：下看中原花青素的濃度值，mg／L；

C_上糖：上看中糖原成分的濃度值，mg／mL；

C_下糖：下看中糖原成分的濃度值，mg／mL。

4、實驗方式

（1）卷心菜黑色素粗提液制取

加入適量卷心菜清洗、剁碎，應用果汁機壓榨原汁，100目壓濾機濾布過慮，3000r／min離心式15min，取頂層清夜冷凍儲存，應用前調pH。

（2）雙水相管理體系創(chuàng)建

固定不動管理體系品質為30.0g。在50mL離心管架中分別添加一定品質的硫酸銨和PEG6000源液，添加一定品質事先調過pH的黑色素粗提液，放水補至管理體系品質為30.0g，放置震蕩器上300r／min于常溫下波動10min后取出，載入左右相容積，用容量瓶各自移取左右相水溶液于30mL比色管中。

（3）花色苷成分的測量

高精密汲取左右相水溶液，各自用pH=1.0的氯化鉀緩沖液和pH=4.5乙酸鈉緩沖液稀釋液適度倍率，以純凈水做空缺，各自在520nm和700nm下測吸光度值。測算左右看中花色苷成分，而測算出K_花。在700nm光波長下測量OD值值是為了更好地校準渾濁對檢測效果的影響。

（4）含糖量成分的測量

以葡萄糖水為對比，選用甲酸-鹽酸測定方法含糖量的成分。線性回歸方程為：y=8.1114x-0.0069，R²=0.9983。各自高精密汲取左右相試品封閉液1.0mL于試管嬰兒中，添加5%的甲酸水溶液1.0mL，快速添加硫酸水溶液5.0mL，混勻，置放10min后于40℃水浴加熱10min，取下后冷水澡5min，以相對應實驗試劑為空缺，在490nm處測量OD值，測算獲得K_糖。

（5）正交試驗設計方案

因為各要素（即硫酸銨質量濃度、PEG的質量濃度、管理體系pH、粗提液質量濃度）中間有互相協(xié)同效應，如表1所顯示，開展正交試驗并剖析，圖1中硫酸銨的含量在最大值18%時，可選擇性指數較大，因而正交試驗設計方案硫酸銨濃度值再次提高，為18%、19%、20%三個水準。

二、結果與探討

1、單要素試驗

（1）硫酸銨的質量濃度對可選擇性指數k的危害在50mL離心管架中添加15.0gPEG6000源液，4.2g黑色素粗提液，各自添加3.0g、3.6g、4.2g、4.8g、5.4g硫酸銨，調整管理體系pH為5，雙水相提純結果如圖所示1所顯示。

由圖1得知，伴隨著硫酸銨質量濃度的提升，可選擇性指數k呈持續(xù)上升發(fā)展趨勢，可選擇性指數在硫酸銨質量濃度為18%時到達最大。伴隨著硫酸銨質量濃度的提升，提高了左右兩相化學物質的分相，提升了上看中原花青素的濃度值，與此同時增強了糖原殘渣在下相的成分，提升了對黑色素的提純水平。