油菜子（BrassicanapusL.）歸屬于蕓薹科（Brassicaceae）蕓薹屬（Brassica），是在我國(guó)具體的糧食作物。伴隨著2015年我國(guó)油菜子臨時(shí)性倉儲(chǔ)現(xiàn)行政策的注銷及其海外進(jìn)口沖擊性的危害，油菜子生產(chǎn)制造的非常經(jīng)濟(jì)效益比較嚴(yán)重降低，在較大水平上影響到了在我國(guó)農(nóng)戶栽種油菜子的主動(dòng)性。甘藍(lán)型油菜子是由洋白菜和大白菜歷經(jīng)當(dāng)然混種雜交后再翻倍后建立的，其2個(gè)先祖全是備受眾多顧客喜愛的爽口蔬菜水果，從發(fā)源與演變的視角看來，將油菜子開發(fā)設(shè)計(jì)為蔬菜水果具備優(yōu)良的科學(xué)研究基本和不可估量的發(fā)展?jié)摿?。近些年在浙江省、湖北省、湖南省、江蘇省等長(zhǎng)江下游主產(chǎn)地，因時(shí)制宜匯總出“菜用 油用”、“菜用 花用 油用”等多種多樣油菜子高效率運(yùn)用開發(fā)方式。有研究表明，在合理的栽種標(biāo)準(zhǔn)下，獲得油菜薹后并不會(huì)對(duì)油菜子的生產(chǎn)量導(dǎo)致明顯危害，此方式可合理提升農(nóng)戶栽種油菜子的生產(chǎn)制造經(jīng)濟(jì)效益。在長(zhǎng)江下游油菜子主產(chǎn)地，油菜子做為冬天農(nóng)作物，不容易直接影響到關(guān)鍵農(nóng)作物的栽種。運(yùn)用冬閑田栽種油菜子，選用油蔬雙用技術(shù)性(即先割菜薹，后收油菜籽)，對(duì)提高油菜子栽種的整體效益，提升居民收入，推動(dòng)在我國(guó)油菜子產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃有著關(guān)鍵實(shí)際意義。

油菜子小苗（5葉期）及其油菜薹上都富含充足的維他命C及其其他營(yíng)養(yǎng)元素，具備很高的吃用使用價(jià)值。培養(yǎng)高維他命C油菜薹種類，既可提高油菜薹的菜用使用價(jià)值，也能為顧客帶來營(yíng)養(yǎng)健康的功能性蔬菜水果。維他命C又稱之為抗壞血酸，是人體內(nèi)必要的關(guān)鍵維他命之一。針對(duì)一個(gè)一般成人，身體需要的絕大部分其他維他命飲食強(qiáng)烈推薦供給量都是在20mg/d下列，而維他命C的飲食強(qiáng)烈推薦供給量卻為100mg/d，是身體中需要量最高的一種維他命，當(dāng)身體比較嚴(yán)重缺乏維生素C的時(shí)候會(huì)造成壞血癥，還會(huì)繼續(xù)導(dǎo)致人體免疫力的降低。維他命C是蔬菜水果和瓜果中最普遍的抗氧劑，參加人體內(nèi)的多種多樣氧化還原反應(yīng)反映。有研究表明，維他命C不但能夠 預(yù)防癌癥，降低惡性腫瘤的發(fā)病率，還能夠改進(jìn)和增強(qiáng)身體的免疫功能，與此同時(shí)具備防止心腦血管疾病的關(guān)鍵作用。身體本身不能生成維他命C，務(wù)必要從新鮮的蔬菜水果、新鮮水果等食品中獲得。精確并迅速地測(cè)量出食材中的維他命C成分，對(duì)確保身體日常維他命C的攝入具備關(guān)鍵實(shí)際意義。

現(xiàn)階段測(cè)量食材中維他命C成分的檢查辦法具體有：碘酸鉀滴定法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法、紫外線光度法、高效液相色譜色譜法等，但大多數(shù)實(shí)際操作繁雜、測(cè)量高效率不高的難題。在執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB5009.86-2016中要求了高效液相色譜色譜法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法為測(cè)量食物中抗壞血酸的方式 ，其中2,6-二氯靛酚滴定法，實(shí)際操作簡(jiǎn)易，可是假如試品中有黑色素等化學(xué)物質(zhì)會(huì)對(duì)滴定管結(jié)果產(chǎn)生危害；熒光法用時(shí)較長(zhǎng)；而高效液相色譜色譜法是一種簡(jiǎn)易、高效率、精確的測(cè)定法。但現(xiàn)階段國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的液相色譜法選用的試樣前解決較為繁雜，一個(gè)試品從解決到上機(jī)操作檢驗(yàn)最少必須15min，測(cè)量高效率不高。在對(duì)大人群樣版的維他命C開展檢查時(shí)，怎么才能并精確挑選出高維他命C成分原材料，提升維他命C檢驗(yàn)辦法的效果就變得至關(guān)重要。

維他命C是一種水溶維他命，化學(xué)式為C₆H₈O₆，分子結(jié)構(gòu)中鄰近的2個(gè)甲基非常容易產(chǎn)生溶解并釋放出來H ，偏酸并具備較強(qiáng)的氧化性，造成 維他命C極為不穩(wěn)定。更何況維他命C在恒溫標(biāo)準(zhǔn)下易溶解，試品的貯存標(biāo)準(zhǔn)危害檢查效果的精確性。因此本分析在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的根基上提升了測(cè)量維他命C的液相色譜法，改善后的辦法可迅速精確地測(cè)量試品中維他命C的成分，與此同時(shí)運(yùn)用液態(tài)氮儲(chǔ)藏并碾磨油菜子試品，促使該辦法可實(shí)際操作時(shí)間長(zhǎng)、檢驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性好、精準(zhǔn)靈巧、利用率高，能長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，可用以大人群樣版中維他命C的剖析評(píng)定及基因遺傳分析，為進(jìn)一步科學(xué)研究油菜子中維他命C的生成和基因遺傳體制確立了方式基本，有益于培養(yǎng)含有維他命C的油菜子優(yōu)良品種。

1 原材料與方式

1.1 原材料

2018年10月至11月在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究室陽邏實(shí)驗(yàn)產(chǎn)業(yè)基地取于的油菜子小苗（甘藍(lán)型油菜子關(guān)系人群原材料，抽樣階段為栽種后30d上下）及其青菜（兔子腿矮腳黃）、油麥菜（西班牙全年度耐抽薹油麥菜）、西蘭花（小圓葉西蘭花）（每一種蔬菜水果的抽樣時(shí)間均處在可食情況）。每一種油菜子挑選5株尺寸相似的原材料（除掉油菜子的根莖和一部分枯黃），青菜、油麥菜、西蘭花一樣各取尺寸相似的5株（除掉蔬菜水果的根莖和一部分枯黃）。

1.2 儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)試劑

高效率液相色譜（e2695，英國(guó)Waters企業(yè)）、PDA探測(cè)器（2998，英國(guó)Waters企業(yè)）、離子交換柱（C18柱，柱長(zhǎng)250nm，內(nèi)徑4.6nm，粒度5μm，英國(guó)Waters企業(yè)）、瓶塞分液器（5-50mL，法國(guó)Eppendorf企業(yè)）、萬分之一天平秤（JJ124BC，昆山市雙杰檢測(cè)儀器廠）、十萬分之一天平秤（AUW220D，日本安捷倫儀器企業(yè)）、均質(zhì)機(jī)（AD500S-P，上海市昂尼儀器設(shè)備有限責(zé)任公司）、超聲波清洗機(jī)（SB25-12DT，寧波新芝生物技術(shù)股權(quán)有限責(zé)任公司）、真空過濾設(shè)備（DET-01P，達(dá)爾拓企業(yè)）、多用途破碎機(jī)（JYS-M01，九陽股份有限責(zé)任公司）。

硫酸（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥控股化學(xué)藥品有限責(zé)任公司）、超純水系統(tǒng)（色譜純，Rephile-watersystem)、維他命C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純凈度99%之上，法國(guó)Sigma-Aldrich企業(yè)）、乙酸銨（優(yōu)級(jí)純，法國(guó)Sigma-Aldrich企業(yè)）、工業(yè)甲醇（色譜純，英國(guó)Fisher企業(yè)）。
尼龍66（Nylon）濾紙（直徑25mm、直徑0.45μm，天津津騰實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司）、尼龍66（Nylon）濾紙（直徑13mm、直徑0.22μm，天津津騰實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司）、微孔板水相濾紙（直徑50mm、直徑0.25μm，天津津騰實(shí)驗(yàn)儀器有限責(zé)任公司）、2mL色譜儀氣相瓶（上海安譜試驗(yàn)科技發(fā)展有限責(zé)任公司）、內(nèi)置管（250μL，上海安譜試驗(yàn)科技發(fā)展有限責(zé)任公司）。

1.3 方式

1.3.1 溶液的配制

萃取液（1%HCl水溶液）的配置：用移液器汲取10mL硫酸（優(yōu)級(jí)純）于1000mL容量瓶中，加超純水系統(tǒng)滴定劑，混勻儲(chǔ)備用。
流動(dòng)性相（20mmol/L的乙酸銨）：用萬分之一的天平稱取1.54g乙酸銨，融解于200mL的超純水系統(tǒng)中，超聲波15min后，再用超純水系統(tǒng)滴定劑至1000mL后再次超聲波減壓蒸餾15min。超聲波完畢后用真空過濾泵過微孔板水相濾紙（0.22μm）開展旋蒸，過慮后的水溶液裝進(jìn)流動(dòng)性相瓶中預(yù)留。為防止因流動(dòng)性相的緣故危害檢查效果的精確性，20mmol/L的乙酸銨需現(xiàn)配現(xiàn)用。

維他命C標(biāo)液(1000μg/mL)：用十萬分之一的天平秤精確稱量0.1g維他命C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100mL深棕色容量瓶中，用1%的硫酸融解并滴定劑，充足混勻后置放在4℃冰柜中遮光儲(chǔ)存。

1.3.2 鮮試品的前解決

用萬分之一的天平秤精確稱量2g新鮮油菜子或蔬菜水果試品的葉子，放置50mL離心管架中，并添加40mL萃取液（即1%的HCl），用均質(zhì)機(jī)將試品徹底勻質(zhì)粉碎。用5mL注射針汲取已勻質(zhì)的試品勻漿，過雙層濾紙（0.45μm 0.22μm），滲瀝液過慮到250μL的內(nèi)置管中，待上機(jī)操作檢驗(yàn)。

試品存儲(chǔ)：將新鮮油菜子或蔬菜水果試品各自儲(chǔ)藏在4℃、-20℃、液態(tài)氮（-196℃）標(biāo)準(zhǔn)下。3d后，將儲(chǔ)藏在4℃、-20℃的一部分試品放進(jìn)液態(tài)氮中冷凍，用多用途破碎機(jī)碾成粉狀（用以前先用液態(tài)氮開展急冷），并放置50mL離心管架中；剩下試品不開展碾磨解決，立即稱量2g試品，其他解決辦法和檢驗(yàn)方式同樣。測(cè)量出不一樣貯存標(biāo)準(zhǔn)及其不一樣處理方法下油菜子和蔬菜水果試品中維他命C的成分。

1.3.3 高效率液相色譜（HPLC）的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)

離子交換柱，英國(guó)WatersXBridge-C18色譜柱；流動(dòng)性相，工業(yè)甲醇和20mmol/L乙酸銨（二者占比為7:93）；流動(dòng)速度，1.0mL/min；進(jìn)樣量，10μL；總體目標(biāo)柱溫，25℃；檢驗(yàn)光波長(zhǎng)，245nm；維他命C的保存期，2.7min。