2、線形與精度調(diào)查

（1）標(biāo)曲水溶液制取

GC：高精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL各自放置10mL量瓶中，用工業(yè)乙醇滴定劑，得標(biāo)曲水溶液，按離子交換柱：AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6x250mm，5μm)，流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇(A)-20mmo/L乙酸銨水溶液(B)，梯度方向過柱(0～8min，10%A；8.1～20min，30%A；20.1～30min，10%A)，流動(dòng)速度為1.0mL/min，氣相量為10uL，柱溫為35℃，檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210nm。HPLC：高精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液0.04、0.4、1.0、1.5、2.0mL各自放置10mL量瓶中，用50%甲醇溶液滴定劑，得標(biāo)曲水溶液。

GC-MS：高精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1mL置10mL量瓶中，加工業(yè)乙醇做成濃度值為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，再高精密量取0、0.4、0.2、0.5、1.0、2.0mL各自放置10mL量瓶中，用工業(yè)乙醇滴定劑，得標(biāo)曲水溶液，按色譜儀標(biāo)準(zhǔn):離子交換柱為J&WDB-624UI(60mx0.25mmx1.4μm)，提溫程序流程為原始溫度60℃，維持1min，以50℃/min提溫至150℃，維持2min，再用10℃/min提溫至250℃，維持26min；載氣為氮?dú)?，原始總流?mL/min，維持20min，以2mL/min升到2mL/min，維持20min，氣相口溫度250℃，分離比10:1，進(jìn)樣量1μL。

（2）測(cè)量結(jié)果

各自以峰總面積為縱軸，濃度值為橫坐標(biāo)軸，得線形線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)r，測(cè)量結(jié)果如表1所顯示。結(jié)果顯示，三種辦法的相關(guān)系數(shù)r均做到＞0.999，且精度RSD均＜2%，說明線形和精度優(yōu)良。

3、方法檢出限和定量限

高精密量取各標(biāo)準(zhǔn)品水溶液，以頻率穩(wěn)定度S/N=3和S/N=10為根據(jù)各自做成方法檢出限水溶液和定量限水溶液，GC、HPLC、GC-MS三種辦法的方法檢出限各自5mgkg、10mg/kg和2mg/kg；定量限各自為17mg/kg、33mg/kg和6.7mg/kg。由此可見，GC-MS的方法檢出限最少，敏感度相對(duì)性較高，HPLC的方法檢出限相對(duì)性較高，敏感度相對(duì)性較低。

4、利用率調(diào)查

取己知成分的某原漿、油類0.5g各9份，依據(jù)曲線圖范疇，按低、中、濃度較高的各自高精密添加分別的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液(GC添加1、3、5mL，HPLC添加1、2、3mL，GC-MS添加0.1、0.3、0.5mL)，每一個(gè)濃度值3份，按分別的水溶液制取方式制取利用率水溶液，三種辦法的利用率測(cè)量結(jié)果如表2所顯示。結(jié)果顯示，三種辦法的利用率均在90%～100%中間，方式的精確性優(yōu)良。

5、可靠性調(diào)查

取三種方式配制的標(biāo)曲圓心濃度值水溶液和利用率調(diào)查的試品水溶液，在常溫情況下，各自于0、0.5、1、2、4、8、16、24h時(shí)在不同的色譜儀標(biāo)準(zhǔn)下測(cè)量，測(cè)算各時(shí)間點(diǎn)苯甲醇峰總面積的RSD%。GC為1.1%、1.3%，HPLC為0.8%、0.9%，GC-MS為1.4%、1.3%，均低于2%，說明三種方式在常溫下有著優(yōu)良的可靠性，能達(dá)到平時(shí)檢測(cè)的要求。

6、試品前解決辦法的調(diào)查

根據(jù)GB5009.28-201方式，取含蛋白的試品1.0g，添加適量的苯甲醇國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，再添加92g/L亞鐵氰化鉀和183g/L乙酸鋅水溶液各0.5mL后，高精密稱量苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品25mg放置10mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋液并滴定劑，得標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。取試品攪拌，高精密稱量1.0g放置25mL量瓶中，加適當(dāng)50%甲醇溶液超聲波獲取10min，制冷至常溫后滴定劑，0.22μm濾紙濾過，得試品水溶液高效液相色譜色譜法項(xiàng)下制取試品水溶液并測(cè)量成分，并與未添加蛋白混凝劑的加標(biāo)試品水溶液測(cè)量結(jié)果開展較為。結(jié)果顯示，蛋白混凝劑對(duì)苯甲醇的測(cè)量無危害。

根據(jù)GB5009.139-2014方式，取含苯甲醇的試品1.0g，放置25mL量瓶中，加適當(dāng)50%甲醇溶液超聲波獲取10min后滴定劑至標(biāo)尺，再添加0.5g輕質(zhì)氧化鎂攪拌，0.22μm濾紙濾過后按離子交換柱：AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6x250mm，5μm)，流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇(A)-20mmo/L乙酸銨水溶液(B)，梯度方向過柱(0～8min，10%A；8.1～20min，30%A；20.1～30min，10%A)，流動(dòng)速度為1.0mL/min，氣相量為10uL，柱溫為35℃，檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210nm色譜儀標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量成分，并與未添加氧化鎂的試品測(cè)量結(jié)果開展較為。結(jié)果顯示，輕質(zhì)氧化鎂對(duì)苯甲醇的測(cè)量無危害。

根據(jù)GB5009.140-2003方式，取含苯甲醇的試品1.0mL，放置中性化三氧化二鋁(100～200目)柱中，用50%甲醇溶液過柱至25mL容量瓶中，0.22μm濾紙濾過后測(cè)量成分，并與未過中性化三氧化二鋁柱的試品測(cè)量結(jié)果開展較為。結(jié)果顯示，中性化三氧化二鋁柱對(duì)苯甲醇的測(cè)量無危害。

7、試品的測(cè)量

搜集市面上的40批液態(tài)型保健品，高精密稱量苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品50mg放置50mL量瓶中，加工業(yè)乙醇稀釋液并滴定劑，得標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。取試品攪拌，高精密稱量1.0g，放置10mL量瓶中，加工業(yè)乙醇融解并超聲波獲取10min，制冷至常溫后滴定劑，0.22μm濾紙濾過，得試品水溶液。高精密稱量苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品25mg放置10mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋液并滴定劑，得標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。取試品攪拌，高精密稱量1.0g放置25mL量瓶中，加適當(dāng)50%甲醇溶液超聲波獲取10min，制冷至常溫后滴定劑，0.22μm濾紙濾過，得試品水溶液。標(biāo)準(zhǔn)品貯備液同氣相色譜分析項(xiàng)下貯備液。取試品攪拌，高精密稱量1.0g，放置10mL量瓶中，加工業(yè)乙醇融解并超聲波獲取10min后滴定劑，0.22μm濾紙濾過，高精密量取續(xù)滲瀝液0.1mL放置10mL量瓶中，加工業(yè)乙醇滴定劑，得試品水溶液。

在離子交換柱:J&WDB-WAX(60mx0.25mmx0.25μm)，提溫程序流程為原始溫度150℃，10℃/min升至180℃，維持3min，20℃/min升至230℃，維持5min；載氣為N2，恒流電源速率1.0mL/min，分離比10:1，探測(cè)器溫度250℃，氣相口溫度240℃，進(jìn)樣量1μL。離子交換柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6x250mm，5μm)，流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇(A)-20mmo/L乙酸銨水溶液(B)，梯度方向過柱(0～8min，10%A；8.1～20min，30%A；20.1～30min，10%A)，流動(dòng)速度為1.0mL/min，氣相量為10uL，柱溫為35C，檢驗(yàn)光波長(zhǎng)為210nm。色譜儀標(biāo)準(zhǔn):離子交換柱為J&WDB–624UI(60mx0.25mmx1.4μm)，提溫程序流程為原始溫度60℃，維持1min，以50℃/min提溫至150℃，維持2min，再用10℃/min提溫至250℃，維持26min；載氣為氮?dú)猓伎偭髁?mL/min，維持20min，以2mL/min升到2mL/min，維持20min，氣相口溫度250℃，分離比10:1，進(jìn)樣量1μL標(biāo)準(zhǔn)下測(cè)量，依據(jù)苯甲醇標(biāo)曲范疇調(diào)節(jié)試品的稀釋液容積，結(jié)果顯示，有7批試品驗(yàn)出含苯甲醇，三種辦法的檢測(cè)結(jié)果一致(見表3)，相對(duì)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于5%。

7、三種方式較為

GC是測(cè)量揮發(fā)物或半揮發(fā)物成份的優(yōu)選方式，其敏感度好，進(jìn)樣量小，檢驗(yàn)高效率較高，檢驗(yàn)低成本，可是僅選用保存期判定，當(dāng)試品中有殘?jiān)绊憰r(shí)，必須調(diào)節(jié)提溫程序代碼最好分離出來實(shí)際效果。

HPLC是試驗(yàn)室最廣泛應(yīng)用的檢驗(yàn)方式，在測(cè)量苯甲醇成分時(shí)，能夠依據(jù)光譜圖開展判定判斷，但因?yàn)楸郊状嫉淖罡呦展獠ㄩL(zhǎng)在210nm周邊，屬尾端消化吸收，沒有顯著的消化吸收特點(diǎn)，當(dāng)有殘?jiān)绊憰r(shí)，很有可能會(huì)危害判斷的精確性。但從文中的檢測(cè)結(jié)果看，本方式與測(cè)量光波長(zhǎng)相仿的10-甲基癸烯酸等作用性指標(biāo)值的分離度很高，受殘?jiān)绊戄^少。

GC-MS對(duì)比前兩類方式 ，其敏感度最大，依據(jù)質(zhì)譜圖判定判斷，并可精確定量分析，但儀器設(shè)備應(yīng)用和維護(hù)保養(yǎng)費(fèi)用較高，強(qiáng)烈推薦做為GC和HPLC的輔助判斷方式。

三、結(jié)果

文中創(chuàng)建的三種苯甲醇測(cè)定法實(shí)際操作簡(jiǎn)易，精確性高，可靠性好，試驗(yàn)室可依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)選用合適的檢測(cè)方式。三種方式對(duì)比，強(qiáng)烈推薦應(yīng)用HPLC法完成測(cè)量，GC-MS法輔助判斷，也可立即選用GC-MS法，提升檢測(cè)高效率。

《保健食品備案產(chǎn)品可用輔料及其使用規(guī)定(2019年版)》中要求的苯甲醛以及醋酸鹽在液態(tài)中藥制劑中的最高用量為1g/kg；在GB/T2731-2017《日用香精》1161中要求，芐醇(即苯甲醇)在第一類加香商品(唇用商品、小玩具)中，最大限定為0.2%(即2g/kg)；依據(jù)JECFA明確提出的芐基化學(xué)物質(zhì)的總應(yīng)用限制值規(guī)定0～5mgkg休重(以苯甲醛劑量計(jì))，以成人休重60kg測(cè)算，苯甲醛類ADI為0～300mg/d這好多個(gè)規(guī)范均可做為制訂食品類或保健品中苯甲醇限定的參照根據(jù)。