維生素E做為一種純天然抗氧劑,具備消除身體氧自由基、保持細胞質(zhì)的詳細和一切正常作用及其避免脂質(zhì)過氧化等生理作用,蔬菜水果是人體內(nèi)攝入維生素E的具體來源于,測量蔬菜水果中維生素E的成分,針對點評它的養(yǎng)分質(zhì)量有著關(guān)鍵實際意義。
測量維生素E的辦法具體有酶活性測定、層析法、熒光法、液相法、高效液相色譜色譜法等,酶活性測定實際操作非常簡單,但精確度較低;高效液相色譜色譜法屏幕分辨率高,但實際操作繁雜,成本增加,針對大批試品測量較為艱難;熒光法非特異強,影響少,靈巧,迅速,簡單,針對測量大批蔬菜水果中的維生素E是一種非常滿意的方式 。但一般熒光光譜法存有萃取劑乙醚對維生素E有影響,使測量結(jié)果精確性低的缺陷。本試驗研究了選用同歩熒光光譜測定方法蔬菜水果中維生素E,該方式解決了乙醚的影響,提升 了實驗操作的精確性。
1試驗一部分
1,1實驗試劑與儀器設(shè)備
維生素E(Sigma企業(yè),進口散裝),用時沒經(jīng)進一步提純,溶解工業(yè)乙醇。別的實驗試劑均為國內(nèi)分析純,常用水溶液均用二次雙蒸水新鮮配置。
日立F-4500型瑩光光度計(日本日立企業(yè))。
1,2試品的制取與光譜儀測量
維生素E選用周松的辦法獲取。汲取一定量的維生素E萃取液于20mL深棕色帶塞試管嬰兒中,添加5.0mL分析純乙醚震蕩1min,靜放分層次后(若有乳化現(xiàn)象,加少量工業(yè)乙醇),用注射針移去下一層,頂層乙醚各自用純凈水清洗2~3次固定不動激起光波長λex=295nm,在λem=300~500nm掃描儀維生素E一般熒光光譜;固定不動Δλ=30nm,λex=200~400nm下,測量同歩熒光光譜,紀錄其λex=295nm處的瑩光值。
2結(jié)果與探討
2,1維生素E的激發(fā)光譜和熒光光譜
用含維生素E2.0mg/L的規(guī)范乙醇溶液作校準光譜儀數(shù)次試驗說明,維生素E的激發(fā)光譜和光譜分析法均為λex295nm/λem327nm,結(jié)果見圖1和圖2,與項光明、李艷飛等的報導(dǎo)相符合。
依照實驗方法,掃描儀乙醚和維生素E(10.0mg/L)的熒光光譜和同歩熒光光譜并開展較為,結(jié)果發(fā)覺,有機溶劑和維生素E在λem=327nm處瑩光光譜分析法互相重合(圖3)。從二者的同歩熒光光譜能夠 看得出,同歩熒光法使2種化學物質(zhì)各自在λ=250nm和λ=290nm上有較大發(fā)送(Δλ=30nm),進而解決了乙醚對維生素E測量的危害(圖4)。
2,3不一樣Δλ對維生素E同歩熒光光譜的危害
選用同歩熒光法測量蔬菜水果中的維生素E時,光譜儀樣子不但與化學物質(zhì)天性相關(guān),且與Δλ相關(guān),Δλ越小,產(chǎn)生的同歩光譜儀峰數(shù)越小、峰形越窄,但Δλ不可以過小,僅有當Δλ與發(fā)送峰、激起峰中間的光波長相符合時,才可以造成非常強的瑩光數(shù)據(jù)信號。2峰的分離出來狀況一般用分離度R表明,當R<1時,2峰有一部分重合;R≥1時,表明2峰能顯著分離出來,達到剖析規(guī)定;R=1.5時,表明2峰能徹底分離出來。
本試驗各自測量了Δλ為10、20、30、40、50nm時維生素E和溶液的同歩熒光光譜,從圖5和表1能夠 看得出,Δλ為10、20、30nm時,伴隨著Δλ的提升,同歩瑩光的瑩光抗壓強度逐步提高且三者R>1,綜合圖5和表1,Δλ=30nm時,維生素E的同歩熒光光譜的瑩光抗壓強度較大,且可以與溶液的熒光光譜分離去,因而在具體測量中挑選了Δλ為30nm。
2,4線形范疇
將維生素E規(guī)范液配置成不一樣濃度值的系列產(chǎn)品水溶液,按以上測定法開展測量,結(jié)果顯示,其濃度值在0.01~10mg/L內(nèi)與其說瑩光抗壓強度成線性相關(guān)(圖6),線性回歸方程為I=16.173ρ 1.1235,I為瑩光抗壓強度,ρ為濃度值,相關(guān)系數(shù)r=0.9995,方法檢出限為0.0025mg/L。
2,5回收利用試驗
取同樣品質(zhì)的油菜子試品,各自添加一定量的維生素E的標液,按以上測定法各自做好解決、測量,測算試品中維生素E的利用率(表2)。從表2能夠 看得出,利用率為101.18%~101.58%,均值利用率為101.37%。
用以上的實驗方法測量具體試品中維生素E的成分,測量結(jié)果見表3,從表3能夠 看得出,相對性相對標準偏差為2.4%,1.17%,表明試驗的可重復(fù)性不錯,試驗結(jié)果令人滿意。
根據(jù)瑩光光譜學對青菜中維生素E成分研究表明,以乙醚作萃取劑時,一般熒光光譜法不能夠清除萃取劑對維生素E的影響,選用同歩熒光光譜法,當Δλ=30nm時維生素E的瑩光抗壓強度最強,且能清除萃取劑乙醚的影響功效。并且在0.1~10mg/L內(nèi)瑩光抗壓強度和維生素E濃度值呈線性相關(guān),線性回歸方程為I=16.17ρ 1.1235,相關(guān)系數(shù)r=0.9995,試品的均值利用率為101.37%,具體試品測量效果的相對偏差(RSD)<5,0%,該法使用簡單,迅速,精確性高,可重復(fù)性好,對大批測量蔬菜水果中維生素E無外乎一種理想化的方式 。